造血干细胞流式检测结果分析

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9 Y% n% n0 o3 b' u( \9 l8 {7 ?! k  @, n, k( p5 n
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

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回复 nailute1985 的帖子# v% E) |& L  g% c1 k
( i, |) h2 Y) \2 r
好的，谢谢！您的意思就是：
7 X1 o2 \1 G! h. ^1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
9 s& ~2 j2 K9 \. }9 h2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
! s8 u4 J1 Q# k& |/ _2 {' X2 f3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

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+ M- X6 U' O. Q9 x$ i我想了一下应该是这样：* A* o! i, J, P& z: C
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,$ ~6 M$ _- Y  B+ r# F& g
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
, i3 W) Z3 A0 O  A1 j, s: D( S3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推" i, p9 y: e5 D7 R" D. g( ?8 H! g
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。- d8 x) {; J  Q, ?  F& G( v6 X
5.检测样品管，并分析.

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* U: ?' U. T+ e* P3 h7 G' N  z5 X( T: N! b! ^
您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
0 [1 B) f$ _$ l4 @6 K' l. d6 X1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？
! H  p1 N0 W6 i& U) f2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？
& {2 s' b  Z, {6 u, I3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

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2 }; {1 @/ [9 B& A. s
) X! T! r) F9 @: x1 e3 ?: w$ |5 TR4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.8 ]8 ]( N( [2 |- r; A" n1 a) L: ]
多谢回答！

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7 [1 t0 h7 N$ `9 ?1.CD34的门？不是从FSC/SSC散点图画门后检测3个补偿管（3个抗体）进行调补偿吗？) T0 e6 I# N0 y( k7 s
2.然后这个画门的位置在哪里呢？

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( H& [* b2 ]  S$ Y( a7 L
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7 g3 C% ~2 w2 U# F1 h
都用同型对照了，还有什么阴性对照呢？难不成还得用细胞做阴性对照，不是多此一举吗？

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' a5 P, G1 D8 J5 Y5 d* m9 p9 c" E8 J我们是用调整过的R4（在FSC/SSC的散点图中，显示R5，把R4的图复制过来后，把门的左侧划到200位置）作为最终的结果，大概0.2%左右。