造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子7 I- N+ r. ?# M5 W0 d+ b

  @/ M: Z; Q( j4 F这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子; H4 U( I) s; z) a4 g& p" i

  x! {: @6 V' B好的，谢谢！您的意思就是：9 x- Q! I1 }4 W' m5 q
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
# b+ N6 ^6 p% y1 s$ I2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。2 h6 i  E2 l' V
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子' g$ l5 {& o3 l' T( S& n! J

  z% g0 \4 p$ a( o4 J2 w我想了一下应该是这样：. r6 S0 j9 \* K% y. f' o
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,
7 Z- G9 C  t( e( G4 o! Y2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体; r" V# H+ a/ Q  `
3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推/ B- I. S) ^4 b. O0 ?2 a! ]
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
6 h( _; K6 w6 d, k8 z" K$ j5.检测样品管，并分析.

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
7 {0 \# S, U& T5 s* X% @3 r% @" x
- E( k. x7 k5 J; m5 a您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
1 Z2 n/ J0 Q8 f$ l2 R2 _1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？0 x! S4 g, e- B* o
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？
8 K/ E' J. n$ k5 X3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子; ~: V: v+ \( m
, ]* A! v  N* d7 ~' K
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.' D3 g) g" U- g$ J: c% k( _
多谢回答！

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
% S4 r! o: P0 @+ v& M* R: Q- `/ V' W
1.CD34的门？不是从FSC/SSC散点图画门后检测3个补偿管（3个抗体）进行调补偿吗？# F7 U5 P) R' Z7 e
2.然后这个画门的位置在哪里呢？

SKC-SFC

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子& e5 U+ l+ g( h

3 q5 z9 u# I& z8 r

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子% S0 D. n9 z* d/ q

5 C- i2 g. b; y$ X4 E+ x都用同型对照了，还有什么阴性对照呢？难不成还得用细胞做阴性对照，不是多此一举吗？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
& E9 b! u/ ]! W8 }5 h' ~
2 ^( u$ o! t) O8 |3 b我们是用调整过的R4（在FSC/SSC的散点图中，显示R5，把R4的图复制过来后，把门的左侧划到200位置）作为最终的结果，大概0.2%左右。