造血干细胞流式检测结果分析

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各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.1 Z% l, Z, w2 X* R8 c
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
" B3 X. `8 [- S% {不明白的地方：3 l% V0 z" d# e* Z0 W# K
1.CD133的必要性
. i* h# g1 }# w2 u0 ~' {2 q2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？. C6 D2 v; s7 K- C( O6 N
3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？
6 X& U- y9 B; B3 s4.我的这个实验思路无问题
3 k8 Y* ~) O' r1 f* W求各位大侠指点，谢谢！
( S# b4 X, A) w   

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回复 nailute1985 的帖子5 Y% _* @: L6 K# A- L
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首先要谢谢您的回复。
# p. r; C& _" T3 \1.选择CD133是老板的意思，因为国外不少文献说，CD34-的那部分细胞也具有造血功能，而且不少国外文献有把CD133加入和协助鉴定造血干细胞。
' R/ }" d* o2 I; e& B2.我们这边也是把CD34+中找CD45弱阳性的那群。
& z9 {/ X! w5 m5 }3.您说您觉得R4就是结果，我一直觉得R3是结果。因为R4不是为了验证这群细胞是否落在幼稚的淋巴群中，只是为了验证？
  q* A' a7 ]4 X3 \2 U4.建立FSC/SSC双参数图的真正意义在哪里？
; G% U  ]3 O. |" B4 F5.设立十字门的目的又对整个结果起啥作用。从实验设计来看，设立CD34+CD45的双参数十字门是为调整R3的位置来设置的哦。
. t5 U' u8 g' d% @. v6.关于R5门的画定，有时候左边的杂细胞群挺多，R5的位置不是那么好花，很担心是把单核细胞群画进去了。

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+ R0 ?) ~9 x: L: |1.我们也是临床，只是老板希望我们先累计CD133的数据，通过将CD34+和CD133+的数据进行统计学的分析，若无差异的话，就可以采取CD34+CD45直接进行标记检测并分析。
+ ^6 ^) P4 T% g+ d) e* |9 z2.从您表达的意思来看，造血干细胞应该具备以下几个条件：CD34+，CD45弱阳性，这群细胞是位于幼稚淋巴细胞群里？
4 g. I& D. ?" N3.我们画R4门，就是在FSC/SSC的散点图中画的。
0 J0 d1 @6 p# }0 A3 s. C$ q/ x& j4.关于十字门我赞同您的意见。但文献都这么做，不知道是为什么？5 ~) I2 p4 o1 x' V- }
5.我们去红还算是非常的干净，有时候做出的我图和文献上一致，结果也好分析，有时候回有左侧拖尾的情况，我们一般是通过调大阈值来去除干扰。因为我们的设备不需要调电压。3 T3 [8 B. j: l  @' t2 [
6.最后咨询一下CD34+CD45+CD133做同型对照的实验设计./ W$ x) y) L0 z; i3 f1 \& T9 S. |: F$ K
谢谢！

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6 A, ]7 @( F, k& Z3 Y谢谢.

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. L! f& r/ ~- G! G8 t) |
  t, m' T3 _$ u, I: h6 s您好？关于造血干的同型对照实验，我还不是很明白。希望您可以在百忙之中帮我解答一下，万分感谢。我们现在是做CD34+CD45+CD133，请问这三种标志物的同型对照实验怎么设计。然后分析方法呢？我们用的是Accuria C6

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CD45同型对照不加吗？那CD45的检测值不需要减去CD45的阴对值吗？

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按您的涉及方案 调荧光补偿怎么调呢？

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: H4 N/ _' _/ K* F& ^& h5 G/ x- X2 `6 }5 g4 }
CD45同型对照不加吗？那CD45的检测值不需要减去CD45的阴对值吗？( R6 x7 C4 w- e. N7 |, k
按您的涉及方案 调荧光补偿怎么调呢？
; y' g) r! u7 Z! R您若把实验设计发给我，我万分感激。谢谢哈

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8 Z4 _$ |. Z! [我们是调完补偿后检测，样品管和阴对管分别分析，然后结果是是检测管的值减去阴对管的值就是了。问题是我们的几个通道都远。只有一个需要调补偿。通道间隔远的，比如第一和第四的话都没有调的必要了吧.