造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.- P0 m- A* J( l
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
4 [/ P/ C7 ?& o4 q7 L: U8 d. S不明白的地方：+ W0 c( s4 g7 g8 L+ w, N1 o
1.CD133的必要性, G7 i: Y- V3 Y3 x
2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？  k+ x3 ]  {! w1 l/ z  N
3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？: M# H& @" e$ z5 q7 R
4.我的这个实验思路无问题. |5 D  [, f  W6 v: r9 ~4 T9 n% B
求各位大侠指点，谢谢！
# c# R+ \& Q& m/ K* i   

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子/ \1 j7 X6 h# w/ e' \, M' L% m
$ z8 j' M! s; ]% H/ k. }6 R
你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子! g$ B0 }* ?: h3 m8 l( }; V

1 ?/ I+ u4 }. C9 `我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子  f4 b/ q0 H' n! v
4 K6 r( Z( |6 i+ a- W& w6 M* A( t
这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子3 j2 t6 }; k3 F) {

; q( t; i1 }! _+ u1 s调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
0 ^" J+ T" f; x; F: d/ U  {7 e6 y0 S) a/ g, R) _0 d
不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子
- o/ c; T, O) R0 N6 O8 a2 F1 G8 l( i  R/ J$ ]1 }& k
R1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多5 ~4 ~; {9 p; z2 r  a# q
R4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子  t% N- U) o# L' y; ~

6 k0 h, G3 i4 j* x5 w, V0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子
8 Y1 y/ U4 J0 g" a/ v( W9 C
$ o! v5 J6 b$ O' }8 v5管没错啊

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子
( V2 J, C- C8 \* M+ @& ~2 ^$ d! _$ ~" T' X) v% Z3 i
晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么