造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.- B* D- R' n, n: g( i. ]
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。- W, p* h' G0 v" D- L8 u8 I, @
不明白的地方：4 B0 b4 ]+ e) l, m5 Q
1.CD133的必要性
% c: m- H8 B$ X+ K  T2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？$ D3 d% f& q! z4 S/ I# I$ g
3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？
" J8 r" }/ w+ n: J8 j  h/ J& V4.我的这个实验思路无问题
& ?! R4 V, F- t! x1 V求各位大侠指点，谢谢！
# p% y# W$ p4 i$ i+ J- l, g7 F   

SKC-SFC

顶起

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子" [& b; @! r  `8 B: C+ {2 }
" Y9 o, O, H9 \! [/ X# u, g1 {. V
首先要谢谢您的回复。, ^4 `& s: G5 N' T( V
1.选择CD133是老板的意思，因为国外不少文献说，CD34-的那部分细胞也具有造血功能，而且不少国外文献有把CD133加入和协助鉴定造血干细胞。/ x  W0 Y5 U% o# \' I4 u2 G
2.我们这边也是把CD34+中找CD45弱阳性的那群。% P3 \0 _# t1 X$ ?7 @
3.您说您觉得R4就是结果，我一直觉得R3是结果。因为R4不是为了验证这群细胞是否落在幼稚的淋巴群中，只是为了验证？
; c  V: b6 R, C" ^4.建立FSC/SSC双参数图的真正意义在哪里？4 x* ?' o) l6 R, m! r
5.设立十字门的目的又对整个结果起啥作用。从实验设计来看，设立CD34+CD45的双参数十字门是为调整R3的位置来设置的哦。
# T8 I& d: }" ~& |) n  x7 _; W0 h3 z6.关于R5门的画定，有时候左边的杂细胞群挺多，R5的位置不是那么好花，很担心是把单核细胞群画进去了。

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
/ y! x  N/ Y- w( e. F- w' @# @* P) F- x
1.我们也是临床，只是老板希望我们先累计CD133的数据，通过将CD34+和CD133+的数据进行统计学的分析，若无差异的话，就可以采取CD34+CD45直接进行标记检测并分析。/ H3 A; B$ f! H8 a$ f7 |
2.从您表达的意思来看，造血干细胞应该具备以下几个条件：CD34+，CD45弱阳性，这群细胞是位于幼稚淋巴细胞群里？  U) Z0 M5 [9 N! ?! `
3.我们画R4门，就是在FSC/SSC的散点图中画的。
$ {' r( f$ v9 y3 J7 X) q/ c4.关于十字门我赞同您的意见。但文献都这么做，不知道是为什么？( i" F: R3 a" D; v( J; T0 e
5.我们去红还算是非常的干净，有时候做出的我图和文献上一致，结果也好分析，有时候回有左侧拖尾的情况，我们一般是通过调大阈值来去除干扰。因为我们的设备不需要调电压。
/ m: y; }1 k% T& {0 R3 L6.最后咨询一下CD34+CD45+CD133做同型对照的实验设计.
  ?! S8 |$ R/ x2 g谢谢！

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
/ G" E! r, f- W6 O7 I$ m
- B: W$ O, z' S1 R/ W4 P谢谢.

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子3 `0 ~8 o2 M: ?7 {
2 ]' N! C3 ], a
您好？关于造血干的同型对照实验，我还不是很明白。希望您可以在百忙之中帮我解答一下，万分感谢。我们现在是做CD34+CD45+CD133，请问这三种标志物的同型对照实验怎么设计。然后分析方法呢？我们用的是Accuria C6

SKC-SFC

CD45同型对照不加吗？那CD45的检测值不需要减去CD45的阴对值吗？

SKC-SFC

按您的涉及方案 调荧光补偿怎么调呢？

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
+ H  n% C3 L/ W
+ I; D" x+ X5 w8 X$ w7 j) O  s, TCD45同型对照不加吗？那CD45的检测值不需要减去CD45的阴对值吗？
0 L, z6 u' e* o1 I按您的涉及方案 调荧光补偿怎么调呢？0 x+ f: J& z5 ~; M* D+ x
您若把实验设计发给我，我万分感激。谢谢哈

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子
! t% H# K, U* J  T7 R2 f5 v0 B2 ^0 k) j% V
我们是调完补偿后检测，样品管和阴对管分别分析，然后结果是是检测管的值减去阴对管的值就是了。问题是我们的几个通道都远。只有一个需要调补偿。通道间隔远的，比如第一和第四的话都没有调的必要了吧.