造血干细胞流式检测结果分析

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回复 nailute1985 的帖子# \/ N- q- J' C" t  ?2 {5 r
% W" t! z7 t0 W6 U/ B6 ]
谢谢.

fm100200

学习了

nailute1985

2、并不是cd34+和cd45弱阳，而是cd34+与cd45+的那一群圈出来之后，相对再找出cd45弱阳的那些。对，位于幼淋那片7 i" }4 N5 d4 v+ \2 V
4、十字门在文献中很直观，直接就能看出来双阳或其他的，不像逻辑门，还得一步步分析，文献中是没办法解释的。' D1 K. ]. v1 k+ i- k# m# }
6、isotype的话，很简单，不就是要去除非特异性的么，所以只要把cd34和cd133换成同性对照就ok了。cd45依然做阳性管6 O% x: L; O3 Q8 r$ u

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回复 nailute1985 的帖子5 T' i: Z1 M9 m/ f) C( e5 q$ L

" Q' `* G, @, ?% r1.我们也是临床，只是老板希望我们先累计CD133的数据，通过将CD34+和CD133+的数据进行统计学的分析，若无差异的话，就可以采取CD34+CD45直接进行标记检测并分析。
; c; r- D* D  Y7 B. F8 w0 Q; y2.从您表达的意思来看，造血干细胞应该具备以下几个条件：CD34+，CD45弱阳性，这群细胞是位于幼稚淋巴细胞群里？
# f! m- y  i* `2 c% c  L  `3.我们画R4门，就是在FSC/SSC的散点图中画的。
3 \# p7 n3 y/ g( f( R+ D4.关于十字门我赞同您的意见。但文献都这么做，不知道是为什么？$ f2 ~. p) L8 n6 q: u
5.我们去红还算是非常的干净，有时候做出的我图和文献上一致，结果也好分析，有时候回有左侧拖尾的情况，我们一般是通过调大阈值来去除干扰。因为我们的设备不需要调电压。
- l; @4 H9 O7 ?. ~2 h, K- O6.最后咨询一下CD34+CD45+CD133做同型对照的实验设计.$ `: u! ?1 W1 N1 ]2 A' m. M
谢谢！

nailute1985

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: n8 m4 Y, w' B' I8 [4 D5 C5 ]3 G  P' T& \; L) t& e9 q
1、你们是研究，我们是临床，所以肯定成本我们会考虑进去，cd133成本会高很多。其实绝大部分的造血干都会表达cd34，剩下的只是极小一部分
0 B( ~7 M3 o* ?3、R3可以基本确定，R4的用意确实是为了验证这群细胞是否在淋巴群里，但是我觉得r4是很有必要的，因为如果你看r4的流式图的话，会发现r4的范围很宽，所以最后圈r4还是有必要的。不能全圈上，不太准。
/ u2 ^+ k3 d9 |' R$ q; C: ?; y- E4、fsc／ssc这个是必须的，无论做哪个标记。这个就是最直观的看三系分区的状态的。0 C- [7 e, D# B- @/ S3 e
5、其实十字门也不是不可以，但是对于逻辑门来说更合适，十字门分区并不是很准确，会有压线那种情况，不好区分。
4 S" l) R2 y; z/ c# G$ A7 l6、这个是比较常见的状态，因为这跟你去红去的干净不干净，或者血液本身的质量有很大关系。

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- f  t7 r1 J: L( M6 T) {  a) B1 C* x$ g, \0 ^5 H
首先要谢谢您的回复。: p! h# m$ F! c# s
1.选择CD133是老板的意思，因为国外不少文献说，CD34-的那部分细胞也具有造血功能，而且不少国外文献有把CD133加入和协助鉴定造血干细胞。
7 Z9 D$ x- `2 G4 T9 D: `2.我们这边也是把CD34+中找CD45弱阳性的那群。) \; p  f6 H- G1 o( X- c
3.您说您觉得R4就是结果，我一直觉得R3是结果。因为R4不是为了验证这群细胞是否落在幼稚的淋巴群中，只是为了验证？
# g: E) W- o# f4.建立FSC/SSC双参数图的真正意义在哪里？
: g% q2 |) I1 I7 R; n5.设立十字门的目的又对整个结果起啥作用。从实验设计来看，设立CD34+CD45的双参数十字门是为调整R3的位置来设置的哦。' U6 t- x; h, _& R
6.关于R5门的画定，有时候左边的杂细胞群挺多，R5的位置不是那么好花，很担心是把单核细胞群画进去了。

nailute1985

1、cd133必要性不是很强，造血干的特异性标记就是cd34+ 所以用双标就可以了。
2 q( V2 b, ^- G( F6 b2、你用的是十字门吧？但是我们做造血干的标记的话是用的逻辑门，大体上是这样的：首先ssc／cd45设门圈有核R1，然后R1里面做cd34+／ssc 圈cd34强阳为R2，然后R2里面做cd45/ssc 圈弱阳cd45为r3，然后r3里面做fsc／ssc 圈弱ssc那部分为r4，r4就是结果。6 j& \/ G/ l. g6 P- B8 r
3、楼主选的是强阳性的cd45吗？我觉得应该在cd34＋细胞群中找到弱cd45的 那才是真正的造血干，并且在ssc／fsc中也要找出ssc弱的那部分。

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