造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133./ U$ Z4 [+ D% C% Q
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。. Q. }8 j: s' A  n9 b
不明白的地方：/ Y6 l( z% R* R8 z- m
1.CD133的必要性
. c, I9 K1 H' Y! q4 r2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？
: [: H6 C; b6 r: |5 z  q+ y3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？" |; p* ?3 Q1 V
4.我的这个实验思路无问题! _7 P* N4 o9 U
求各位大侠指点，谢谢！2 H7 |" d5 q$ I! X' j  m4 w0 V
   

nailute1985

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, n7 S7 K2 _. H7 f+ P6 L- W
4 I+ D1 b  n0 @  [7 E- [8 U你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子" F; z0 O+ M2 l: ]8 J3 z: R

0 x( L1 n7 p; r- B. w* h我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

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/ ?2 t7 I, K6 f, x* w* c$ ]- d& H" n+ ]: J7 i$ K
这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

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* V  X8 t7 r8 E6 w; y: o/ h" u* X' @( r/ u8 T9 `
调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

SKC-SFC

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' A' R( f* @0 n5 _  K8 v
7 M& l; E+ X0 q7 X" D/ L不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子* b4 r' m! n2 w2 L7 i8 c! ?+ W, z2 a
2 E: I! q! h: s5 [5 j! D
R1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多# F; e; j) o# A- N" x* u
R4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

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$ R2 w+ d6 Q- M1 _5 C* C9 v4 C  a& a
0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

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5 ~5 E5 [$ @8 H0 w8 R3 M) R, n6 R- F+ n5 O, x3 U
5管没错啊

nailute1985

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+ Z5 o' ?& j- c* W/ N" M) P  Q晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么