造血干细胞流式检测结果分析

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% z3 C) \! W  a8 g, i9 Z- Y
4 c4 X+ K  G* h8 \R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.
8 y2 {! n: E! V1 F" g3 f/ ]+ L多谢回答！

SKC-SFC

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% C& @% `3 k$ B- }
8 b% v. C7 ~6 \2 P! _3 v. P+ m您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
+ C% E0 ~* T6 x1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？" P/ I6 w, S: e6 R
2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？- U/ L4 Q- D! y% x; i9 i! X( t
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

nailute1985

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  Y9 X! G5 r' L& D
( W9 Z3 n4 e+ n2 i7 |十字门不需要的～你这个是逻辑门，例如：只要把阳性管中FL1的名字改成isotype就行了

nailute1985

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5 @" g6 N3 `, q* a  R; ^. p) u' P
  b/ g/ [# v: x8 H: [是这的没错

SKC-SFC

回复 nailute1985 的帖子3 Z3 B3 X; h! n$ S9 n
0 F8 v9 m/ S* Z% K! F. O8 s
我想了一下应该是这样：" V: O3 X3 u- P+ ]
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,& E8 b# k& e$ M
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体, |. l" t+ c; V
3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推
% `6 Z5 \+ T8 v& g" f: d; [& h4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
6 P8 r6 K- H6 Z5 O5.检测样品管，并分析.

SKC-SFC

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/ d, v! m1 P1 `1 l- w6 o6 i# g% b) w
( a. k. ~4 z# r: f3 O% m好的，谢谢！您的意思就是：, o9 c, K- Y+ Z
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体8 E9 n8 n" c% J' v/ z$ w
2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。. }2 a% v; r( j2 f1 v9 [1 P
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子8 \) Z$ K% j" t: C( u
2 F' e! `, ?, Q6 I4 Y
你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

nailute1985

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3 G! a$ \) R6 h% j) c& g
; w. [7 D. d9 B( N& a2 X' T对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

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* x1 L( W- o: x) `  d) A( U* L* B8 p1 D
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

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回复 nailute1985 的帖子- x( B- Q2 A1 I- w( V
4 p- v& ^- i8 G, I5 o+ u( x0 r
我们是调完补偿后检测，样品管和阴对管分别分析，然后结果是是检测管的值减去阴对管的值就是了。问题是我们的几个通道都远。只有一个需要调补偿。通道间隔远的，比如第一和第四的话都没有调的必要了吧.