造血干细胞流式检测结果分析

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, \9 C2 a( N& {' B$ x: M; l
' _  q& V: o$ d% ~/ p谢谢.

fm100200

学习了

nailute1985

2、并不是cd34+和cd45弱阳，而是cd34+与cd45+的那一群圈出来之后，相对再找出cd45弱阳的那些。对，位于幼淋那片7 p9 u- q$ G% d" l' a1 H# t
4、十字门在文献中很直观，直接就能看出来双阳或其他的，不像逻辑门，还得一步步分析，文献中是没办法解释的。$ X8 f! d- Z9 h5 ^3 A6 A
6、isotype的话，很简单，不就是要去除非特异性的么，所以只要把cd34和cd133换成同性对照就ok了。cd45依然做阳性管1 t# Z* h4 p6 [7 L* O) F

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回复 nailute1985 的帖子9 R% N4 Q! u- `: U) F

3 r9 ~* ?! h6 V" y& L4 G$ k1.我们也是临床，只是老板希望我们先累计CD133的数据，通过将CD34+和CD133+的数据进行统计学的分析，若无差异的话，就可以采取CD34+CD45直接进行标记检测并分析。" s& [% s7 A2 R; V1 b
2.从您表达的意思来看，造血干细胞应该具备以下几个条件：CD34+，CD45弱阳性，这群细胞是位于幼稚淋巴细胞群里？
- ]$ p# E& x( }5 `" Y3.我们画R4门，就是在FSC/SSC的散点图中画的。
2 g; A5 ?) O8 _' h" O4.关于十字门我赞同您的意见。但文献都这么做，不知道是为什么？5 r7 t+ X  K/ n: Q5 {- d
5.我们去红还算是非常的干净，有时候做出的我图和文献上一致，结果也好分析，有时候回有左侧拖尾的情况，我们一般是通过调大阈值来去除干扰。因为我们的设备不需要调电压。
! \- w5 }3 f& e/ [% F9 |6.最后咨询一下CD34+CD45+CD133做同型对照的实验设计.: J: U# Z/ `0 A0 l1 ]. N
谢谢！

nailute1985

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0 p& V, P; I$ j! |6 t0 \) t, \( B' e3 Q3 u- u% a
1、你们是研究，我们是临床，所以肯定成本我们会考虑进去，cd133成本会高很多。其实绝大部分的造血干都会表达cd34，剩下的只是极小一部分
; y7 i3 O- h- H8 Z6 o5 Y2 S3、R3可以基本确定，R4的用意确实是为了验证这群细胞是否在淋巴群里，但是我觉得r4是很有必要的，因为如果你看r4的流式图的话，会发现r4的范围很宽，所以最后圈r4还是有必要的。不能全圈上，不太准。
' L. q; D2 h( d* n. l4 l4、fsc／ssc这个是必须的，无论做哪个标记。这个就是最直观的看三系分区的状态的。- O9 e, u4 J3 ]6 |
5、其实十字门也不是不可以，但是对于逻辑门来说更合适，十字门分区并不是很准确，会有压线那种情况，不好区分。
. x: X# v- n2 h' O& I6、这个是比较常见的状态，因为这跟你去红去的干净不干净，或者血液本身的质量有很大关系。

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$ A8 i' P1 x; E! b( `  _
8 W* Q9 _2 g! D% E% @4 J首先要谢谢您的回复。
% Q2 T+ D/ x# u2 j/ f# \) l1.选择CD133是老板的意思，因为国外不少文献说，CD34-的那部分细胞也具有造血功能，而且不少国外文献有把CD133加入和协助鉴定造血干细胞。
; N, G# S6 t2 B! P$ U$ }9 l2.我们这边也是把CD34+中找CD45弱阳性的那群。
. K4 V0 w$ `2 ~( U. c: w3.您说您觉得R4就是结果，我一直觉得R3是结果。因为R4不是为了验证这群细胞是否落在幼稚的淋巴群中，只是为了验证？9 P  V% f* p2 R7 I9 z
4.建立FSC/SSC双参数图的真正意义在哪里？, H9 V% L# ]3 ^' Z3 ~  k
5.设立十字门的目的又对整个结果起啥作用。从实验设计来看，设立CD34+CD45的双参数十字门是为调整R3的位置来设置的哦。% W$ I- U1 M% z+ x. d
6.关于R5门的画定，有时候左边的杂细胞群挺多，R5的位置不是那么好花，很担心是把单核细胞群画进去了。

nailute1985

1、cd133必要性不是很强，造血干的特异性标记就是cd34+ 所以用双标就可以了。
, N+ p1 n9 ?5 r; H2 b- X2、你用的是十字门吧？但是我们做造血干的标记的话是用的逻辑门，大体上是这样的：首先ssc／cd45设门圈有核R1，然后R1里面做cd34+／ssc 圈cd34强阳为R2，然后R2里面做cd45/ssc 圈弱阳cd45为r3，然后r3里面做fsc／ssc 圈弱ssc那部分为r4，r4就是结果。  M* d$ d9 w$ E- d1 O$ C7 }# a
3、楼主选的是强阳性的cd45吗？我觉得应该在cd34＋细胞群中找到弱cd45的 那才是真正的造血干，并且在ssc／fsc中也要找出ssc弱的那部分。

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