造血干细胞流式检测结果分析

SKC-SFC

各位大侠，我们实验室目前在做造血干细胞的鉴定。采用流式细胞仪检测，选择的标志物是CD34+CD45+CD133.9 f3 E/ u6 G$ }4 _
方法是：标记去红后，用CD45/SSC画R1门，圈定白细胞-画CD34/SSC双参数图，显示R1门，画R2,-建立CD45/SSC双参数图，显示R2门，画R3门-建立FSC/SSC散点图，显示R3画R4门-回到R1门所在图，选择CD45阳性最强和SSC最大的位置画R5门-重新确立R4门的位置-画CD34/CD45&CD45+CD133双参数的十字门，确定R1门的临界位置来重新确定R3的位置。
- r2 ?; f* [9 _* g% u不明白的地方：
2 ?& L# D& H* _& y1.CD133的必要性: D/ U5 O7 c9 C! j+ N+ `
2.最终造血干细胞的统计学数据是R3还是R4的统计学数据？
) d; p# I- |: w' n# L3 C3.通过R5门来重新确定R4门作用在哪里？( W! g. O* n  B1 F
4.我的这个实验思路无问题/ H" P7 P# j- @, f  q0 }' d
求各位大侠指点，谢谢！
" f" |2 F$ n! }' t4 j" ]$ [   

nailute1985

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% b/ y# S0 w- @' L( y! Q
你们的样本那么不纯的话 结果肯定不准确的。洗涤，裂红这些都需要

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回复 nailute1985 的帖子% h. A! n1 Q3 R- V# G

3 R2 w+ X5 E: }0 S+ N# m' m; e* A我们根据您的说话，又重新分析了，发现结果高了差不多一倍。说明样品还是存在问题。我们的造血干细胞的样本里面含采集液，成分很复杂，估计有不少类似碎片东西。下次实验我们想标记前洗涤几次之后再标记，也许拖尾不会那么严重。

SKC-SFC

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# ]1 K7 I, R& p8 @( K7 T' j7 K( M. i& _
这个我明白，我们都是调好的，然后检测待测管，这个没有疑问。但我们的第一管是加了细胞和三种同型对照抗体，这个是作为阴性对照来使用的。用待测管的值减去同型对照的值得到最终的结果.

nailute1985

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* G( `  [; o2 U9 J. D2 Q; I% y& |$ G& u7 @. x
调补偿的叫做荧光补偿管，说白了就是一个相对于阳性的阴性管罢了，这个是在实验前就的调好了的

SKC-SFC

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/ C& ^; F" k/ E0 T
不是吧。调补偿有专门的补偿管。阴性对照跟调补偿毫无关系好吧。一般以前我们是光细胞做阴对只是考虑了细胞的自发荧光，没有考虑细胞与抗体Fc段结婚，所以用同型对照来排除非特异性的干扰。

nailute1985

回复 SKC-SFC 的帖子. b3 L! }" o. R2 r4 \6 U$ }" h

+ x/ n/ ?) D# R( i) ~R1差不多就是你那个位置，可以再往左来点  觉得你的碎片比较多
* |$ ^- l  b3 l$ G' yR4我觉得你的ssc选的高了，往下来点可以 但是你这个r4分了两个群了明显 倒是可以都画进来 但是ssc一定不要太高

nailute1985

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9 [  {  R( n% I, u9 N: ?
7 {  h& J  M6 T0 T$ b0.2％也正常的  cd34+细胞百分率不是很多的

nailute1985

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9 t. O8 l& [7 Y+ W* q9 G& |
( ^( ?, }, B  C% d! w: U5 o7 J5管没错啊

nailute1985

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- W8 h/ q8 |! C3 D8 J0 s8 W1 {2 _* P' E% |; _  |
晕 阴性对照不是让你调补偿的么，同型对照不是做实验的isotype么