造血干细胞流式检测结果分析

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回复 nailute1985 的帖子3 O) b9 v: [" g
8 z' d1 }3 k! Q% a% }+ [- q% B
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

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. E; w8 H4 c2 ?' V+ k  ^" w* O- }好的，谢谢！您的意思就是：6 d: T2 l" Z6 n3 M0 a& B$ ^
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
, x6 ~8 e. H! J, \; d: N4 N5 w2 @2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。2 d: o7 ?" B" P5 a2 X1 h$ T
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

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回复 nailute1985 的帖子7 b9 Y, K) l( k* V9 b

9 p) a' b6 z4 P. U) d我想了一下应该是这样：' n# c. [$ n  k; ~- g# s, c0 @( s
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,
) O# {5 x: l- O# U  \& n2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体
8 R' J$ T4 z" J. p& G+ b9 Q3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推" h% P1 p, d! F  ~3 L& u; a
4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。
7 |: D/ m2 m8 M: ~0 a5.检测样品管，并分析.

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回复 nailute1985 的帖子  D( G" Q- e) {+ w4 \: x/ I8 d
0 d* R" F: p; y' H4 q2 m
您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
" N- ?" r+ u5 @: i7 ?) E$ g1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？
/ K  z% a6 ?0 q2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？
2 O  ]# _6 w- g& x, T3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

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# s: R) |' X9 G' R( T( ]9 b2 p: p+ g6 j6 f1 f% X
R4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.4 Y. D2 J) y% [
多谢回答！

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回复 nailute1985 的帖子# v8 {) i! t/ P3 P
2 B/ B- N# z% Z% j* X. g! s
1.CD34的门？不是从FSC/SSC散点图画门后检测3个补偿管（3个抗体）进行调补偿吗？2 ?( c# k# J; \$ Y$ X
2.然后这个画门的位置在哪里呢？

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$ F' @& |, k3 `$ E9 P1 e
# s# I- Z" ^$ Z7 `7 \都用同型对照了，还有什么阴性对照呢？难不成还得用细胞做阴性对照，不是多此一举吗？

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: `+ k6 x$ d  t3 r( G$ G2 E9 \2 O* W% O
我们是用调整过的R4（在FSC/SSC的散点图中，显示R5，把R4的图复制过来后，把门的左侧划到200位置）作为最终的结果，大概0.2%左右。