造血干细胞流式检测结果分析

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  {( Y$ z2 N8 y% a1 }' x& u: T4 ?7 \9 Z* \6 \) _+ s
这个地方我有点糊涂了。我们以前做表达量高的时候，基本就不做补偿，直接做空白的细胞对照。现在这个造血干细胞因为表达量极低，必须做补偿。我看文献上都说是用同型对照（阴性对照）去调补偿之后，再测定单个的项目？

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8 `6 O& ?) d! O0 v2 c. |. B) `" l: b/ r" A7 x  a3 q' I% e* h
好的，谢谢！您的意思就是：
0 g- r# z8 G) f: K% {+ S( s3 E1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体2 |1 C. ~# }  c" C
2.测定对照管，根据检测情况调补偿和阈值。调至合理范围。通道之间无荧光干扰。) C! Y1 `* O. o, @
3.检测样品管，画3个图FL1,FL2,FL4进行分析。这个时候还需要话FL1/FL2，FL2/FL4，FL1/FL4的十字图吗？

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; [: t$ _% q+ |8 u1 o" U( \+ R# ]8 u2 c. f8 x3 t/ t1 b6 A  }8 W
我想了一下应该是这样：3 ]" M# A( M+ K6 Y* U
1.样本品管仲加入待检细胞+CD34-PE+CD45-FITC+CD133-PerCP,: I  ]$ f2 x" l* `# ^: E4 T
2.阴性对照管加入待检细胞+CD45+CD34-PE和CD133-PerCP的同型对照抗体# L' `; C: Y) @& Z* ?& m8 z& x8 G
3.补偿调整管：需要3管，一管是CD34-PE+细胞+另外两种抗体的同型对照抗体，以此类推
: z8 F: a" K) u  R+ \& D. W7 E4.根据检测情况调补偿，调至合理范围。通道之间无荧光干扰。3 N- Y2 q% r# n9 W( C  |4 Q. ~
5.检测样品管，并分析.

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% Z+ v! l: W6 @1 r. E+ }0 ?+ v  ?4 `* y6 T+ Z! [- ^6 {5 j1 C
您好，最近我们又做了造血干细胞的鉴定实验。有几个问题我需要咨询。
/ v7 d* N2 U( X' S1.在检测同型对照的时候，是需要先划门吧？这个门怎么划？
. I0 _, B2 ]0 m) m1 }! L$ V. @, r1 a2.在调补偿的时候，为什么3和4通道的荧光没有干扰，不需要调整呢？而1和4通道反而需要做出调整呢？  x6 U8 j+ Z3 m2 M3 _, ]" ?9 y
3.我看文献上说，逻辑门R4显示出来后，还需要去除比淋巴细胞还小的那一群。但看不出来这个是怎么划新的R4门的？

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, p4 U. a. p2 xR4门比较宽，说是需要进一步去比淋巴细胞还要小的那部分细胞或杂质。大概方法是从SSC/CD45的散点图中选取淋巴细胞那群，然后设为R5，然后重新简历FSC/SSC散点图，把R4门复制到此图中，并显示R5，说门划到SSC最低和FSC在100的位置，这个200是左边起还是右边止呢？但得到的结果15%以上，这样的结果不对啊。另外有个样本的同型对照荧光比检测荧光还要强.# ~, l+ o5 T8 l
多谢回答！

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0 O( D9 _5 ^. j, i7 j; s. g- ?: n
1.CD34的门？不是从FSC/SSC散点图画门后检测3个补偿管（3个抗体）进行调补偿吗？' z, c* x* B7 X+ Y
2.然后这个画门的位置在哪里呢？

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, l5 D; D+ z4 p) c# W. j# m- X/ K) ^
都用同型对照了，还有什么阴性对照呢？难不成还得用细胞做阴性对照，不是多此一举吗？

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# Q+ W5 `* A0 p! j8 t
/ y1 M$ w) K7 ?' U我们是用调整过的R4（在FSC/SSC的散点图中，显示R5，把R4的图复制过来后，把门的左侧划到200位置）作为最终的结果，大概0.2%左右。