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目 录
- ?) `- |4 |5 N% P) Z6 N转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
; L% Q0 P: g% W8 I1. 简介 . . 1
) O" Q6 T- k! |# H; z2. 转染基础知识 . . 2
, r ^' w+ o, O2 i) y转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
3 P9 A4 A, C4 U Z$ M8 T什么是转染 2
6 B( Q! R" N& p6 W* q! q4 E术语 2
8 L. Z+ @. B2 ]9 D% J! f# V8 x应用 3
) X* W% K$ j6 G3 ^" Z转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47 J! c' w& X2 H- o r3 ?
瞬时转染 4
* B5 d' E$ U/ V& x1 P" j' Z. f稳定转染 4
6 n3 G$ e6 x4 ] D8 u6 m选择转染策略 . 5
) K6 a+ ~. M3 D! C; P基因输送技术 . . 7
: M& C$ B& ]% ^ \. j阳离子脂质体介导的输送 9* k4 N$ e6 D! ?7 r9 d' x
磷酸钙共沉淀 109 p& r7 ~$ U' o; R: k, _6 o
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
+ ]1 e+ Q, V* b3 m4 P; w2 z" W7 n其他阳离子聚合物输送 . 12
! D+ v9 k0 N6 v, y6 X1 `9 w b病毒输送 13
2 o1 c! O: t( ?) g8 e( m电穿孔 . 146 D% L3 a# h& X5 c/ _( {) M* M
其它物理输送方法 . 15
( J7 {) Y' P. e阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
2 F( U8 w2 z- S2 h% O0 t机理 16
9 Y+ Q" v- N3 V+ l阳离子脂质体转染试剂 . 17
) {. t M, z, L病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
3 V5 O5 D- g2 W* a病毒载体的主要特点 . 19
! w Y& ~8 Y* d- [; _ B* ^6 F9 C1 b+ n常用病毒载体 19* e. w5 f6 L# r' c6 p% c/ L
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21- @- }2 V: Z- ^# v% x
稳定转染子的选择 . . 23
4 Q$ m+ H( j# u7 C用于真核细胞的选择性抗生素 . 23$ [9 [$ a+ i% n' v" F3 I
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 244 r5 X7 q- a8 d7 d) s: \
转染分析 24: i3 T' _1 M* {2 H' l% ~
基因调控分析 25
' q7 V1 Z8 C, H' G常用的报告基因 25, X; Z1 O! q+ I
RNAi和非编码RNA研究 . . 267 Z8 R8 c; B; |3 U2 l3 D
常用RNAi术语表 . 26
. `. f: m" |" `3 T: o/ c% xRNAi工作原理 . 279 w0 K6 a/ x7 X4 b
siRNA分析 . 277 B6 {6 q$ J' w2 v
miRNA分析 28
4 M. d7 ]- s n+ u% P选择RNAi方法 . 295 |! e/ h* B a9 @9 F& ]
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
1 j& k; O" R+ X1 q. i% Y7 K7 G影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
8 k6 P0 M1 t7 W n5 L- \9 H, d细胞类型 30+ k# r$ \! h# M9 S4 x, K; l
细胞健康与活性 31
9 W1 d8 Z5 `; q1 F" B汇合 . 32
8 Y$ X( ~2 o/ V% k% M培养基 . 32/ X1 f, t, b; _. P3 @/ |3 d
血清 . 325 E2 L p" y" h2 q- }* Z% I9 n
抗生素 33
' `* F: _0 k I: R3 V8 v7 w# P" S转染分子的类型 33
, A6 ~& Z- V. Z6 P; j. R$ `: \9 ?转染方法 33' G q9 d0 Z2 P% N t+ k
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
3 Z( c) h& w2 A, f; B) O连续细胞系 . 34
$ u& I9 V% h# K原代细胞和有限培养物 . 35) f" T9 B- v2 N$ m4 g- D0 y
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36* q2 g4 z/ n/ `: r4 {
哺乳动物细胞表达系统 . 36( p4 X6 Z/ M4 k( h( i
昆虫细胞表达系统 . 37+ U$ {) h2 k+ z( S2 C8 f' q
质粒DNA转染指导原则 . . 38
" [* d, k8 {3 {% z$ c9 x) g1 I0 e u载体考虑因素 38
) E2 b" E( ^2 d2 a* [质粒DNA的质量 38
- ^0 \' N, ~$ U% v, k' r基因产物和启动子 . 390 ]: O" ^' E1 r/ f* w" \
对照 39 L% b" w& t/ q. @& B( ^; j# o
质粒DNA转染的优化 . . 39- Y( a) u1 C: F4 z- x
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40& [4 _: b4 a! T; q. U
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
( ]4 ~6 k# H6 v电穿孔的考虑因素 . 439 G' V7 G, f$ W+ {+ K' f: f
稳定转染子的选择 . . 44
4 t$ N S5 ]8 ~! `$ V2 O开始前 44
* j- |$ d) H& s$ G+ C$ F3 H杀死曲线 44- @( e. T. O% e
选择工作流程 449 z& N+ { Z7 v9 S1 H
选择RNAi策略 . . 46) e& U' J. v3 a f- L
siRNA与载体方法 46( n' V5 n* z) N, J" ]. W, z7 Z6 c9 o
非载体siRNA技术 47
8 g. o! `, ~0 B: U2 B- DsiRNA转染 . 49! P: R: d2 J# Z5 y
载体介导的RNAi . 50
2 a% z# W4 I$ N, aRNA转染指导原则 . . 51
" d W3 _7 o7 hRNAi工作流程 . 51
) ~8 j8 ^! K: ^5 f" _RNA处理 52 v# M/ g- N. `
转染效率 526 S( L& f H7 j X$ A7 Z3 d
阳性对照 . 52
1 I7 x. {" w$ l* m2 |/ i0 q4 B3 o阴性对照 52+ S$ I; j2 i6 H( c0 p9 e
共转染 53* k; {( t( f: Z6 c( h+ d6 L
siRNA质量 . 531 _% F4 Y: t7 k' A- Y. ]$ r
siRNA用量 . 54
/ E8 b( G* v. O7 {! v5 @+ B转染试剂的体积 54
8 w( w. z- n( l细胞密度 54) V/ k5 T! S4 ~% J! f. x0 ^
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
$ k5 W. h8 ?( [3 `转染过程中存在血清 . 55, t; Z( }2 `" P9 J8 u: z
siRNA实验成功的技巧 55
. t; E l- V6 y& ssiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56& a* F$ t* |, @3 c0 \0 _$ C
影响siRNA效率的因素 56
- ?2 q N! g. {附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
( Q% A$ A' |6 O+ C$ ~% E转染产品列表 . . 57/ e5 H. y: Q7 ~2 ]# Q
转染试剂 57
0 A/ t" k8 q0 |2 F. T. m0 B9 q$ YNeon®转染系统 . 585 p1 y1 D8 `+ X* E! ]' u
RNA干扰 58
, F) Z/ a% }' C% c参考文献 . . . 59& f4 Y( z( x+ p7 a
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发表于 2015-7-9 09:28
