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目 录' L `3 A, u! p8 A# ?
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
3 N r- G4 ]% E+ h V! f; l1. 简介 . . 1
- Q$ y/ ]% v6 F3 F) z- B& f4 J2. 转染基础知识 . . 2
6 { s! W' ^1 H- t9 a& j转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2' @& v; ^8 P8 k" X
什么是转染 2( z0 _. i" e. |
术语 27 s4 T7 q& X2 X
应用 33 ~6 b" r' M9 w" b
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
/ X4 D2 u" K+ {瞬时转染 4
7 }% j8 t' J6 \9 W0 Y稳定转染 4
; Z- |" {; o" w! _2 G. G选择转染策略 . 5
, _ z; }% C+ o基因输送技术 . . 7+ v; Q" ], ?+ U5 {+ E. x
阳离子脂质体介导的输送 9
2 \( u; d0 B" i8 d磷酸钙共沉淀 10/ U) n4 h: R. P$ U( L
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11$ h9 J: H4 a6 B; D4 O1 W; i
其他阳离子聚合物输送 . 12
/ a U! k, V7 d8 Q病毒输送 13
! `, u. f7 E& Y/ L7 P电穿孔 . 14# j$ Q5 M9 \' U
其它物理输送方法 . 15
5 a- K4 |* R- i/ f: ?阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
1 \* [6 W3 i% S机理 166 ~$ E4 H3 B9 Q
阳离子脂质体转染试剂 . 17
/ X' s5 ^) F5 u病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
& r4 l0 g& v4 |$ h/ R病毒载体的主要特点 . 19
I5 q1 O; |/ V# B# d" \: O常用病毒载体 19
! |' h; d: M9 S7 `6 gNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
6 N; F9 |. p' {$ T稳定转染子的选择 . . 23
7 k: n( K2 x) R用于真核细胞的选择性抗生素 . 231 _6 U% n' {) n! q- a) d4 q1 D |
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24+ J9 m* c* g8 ]4 h1 c' c: a0 ]
转染分析 24
2 V* ^# V+ }9 I/ M4 z5 s5 x基因调控分析 25! m$ A! c+ H- _
常用的报告基因 25
9 G! m- {& u. F5 X2 U2 v& TRNAi和非编码RNA研究 . . 26
/ T) d) T2 N& q; e8 ]常用RNAi术语表 . 26
" Y4 S5 E9 u$ ~- H+ w) QRNAi工作原理 . 27
/ b8 t" |" C: HsiRNA分析 . 27( g6 d+ |' n3 [; s& I. s' Q7 H
miRNA分析 28' Q; C. u% c6 g
选择RNAi方法 . 29% L. v: l, P8 y2 F# L
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30/ P# C6 C- X- m
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
: K7 t$ l5 s3 W8 O4 k细胞类型 30# n! z; I K! |: D& f
细胞健康与活性 31
; |2 A: k% M7 R( ]1 F0 r汇合 . 32 L, S+ ]1 c4 x% A z6 j5 U
培养基 . 32
6 Z4 p$ y5 o# Y0 i3 H/ N- F! `血清 . 321 U7 |2 z* [5 @4 |- u
抗生素 33& K) K" k! z( A6 l: x0 d7 ~
转染分子的类型 33
! M X" b) l& u转染方法 33
( Y9 }9 j2 j d) {9 ?6 {4 l. G选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34# _- |. a( B3 ]9 T5 H: m% m
连续细胞系 . 34/ ?$ I) D7 A" n8 z8 c5 |7 v4 W
原代细胞和有限培养物 . 35( _4 m9 n5 c- S2 u8 B; W
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
7 i/ C( `) c$ `( ~9 O$ }哺乳动物细胞表达系统 . 36
: b' K, Q" j$ Z8 H2 ~. f昆虫细胞表达系统 . 373 Q2 w+ b1 ?) j M e$ i
质粒DNA转染指导原则 . . 38; s5 ?3 O8 y+ ^. X& t3 u9 p9 D
载体考虑因素 38
9 n/ l' s& h2 l+ m# ]6 \1 E质粒DNA的质量 38
2 G2 G9 b1 M0 @" j- M0 h$ B基因产物和启动子 . 39
2 ~- C0 @( S. b* F4 D' d& C对照 39
* k [6 d2 ^' K' D4 U/ t. g质粒DNA转染的优化 . . 39
! r# |. n- X$ R. h2 ~磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
+ [/ H. F# E" g$ w: F* K0 R1 V阳离子脂质体介导的转染考虑因素 419 U: e" i" v7 v$ \. ~6 f
电穿孔的考虑因素 . 43) B5 Q5 q8 o4 b8 H, Q3 G2 _
稳定转染子的选择 . . 449 H( M$ R# x5 u/ |6 k5 a
开始前 44
( H2 t7 M; P8 t: Q: c杀死曲线 44; F6 \* e5 t! a7 S7 N5 K- |
选择工作流程 442 {; E) \4 B2 H8 J( Y( ?
选择RNAi策略 . . 46
# @( y6 K9 J( k3 t$ K- V% osiRNA与载体方法 466 E) p6 X+ M- U& F
非载体siRNA技术 47
$ B: H: B% n" m' B8 |siRNA转染 . 49
2 t( w! T9 e/ |6 s载体介导的RNAi . 50
& L" O/ r: ^8 i' X( h/ W0 uRNA转染指导原则 . . 51
: ^* V4 F1 G2 T0 \! I$ ERNAi工作流程 . 516 O1 C1 k3 M' }) y3 h/ `
RNA处理 52
( c9 v7 I' U0 _转染效率 52- ~8 A- J6 V1 t U% [+ Q. u
阳性对照 . 52
" ^* \: h3 r% l- e. E+ K$ i6 `9 ~阴性对照 52
+ @2 `0 ?9 h( G. V. R共转染 53
, u2 E5 V4 @/ AsiRNA质量 . 53
7 J V4 g- n* l8 \# BsiRNA用量 . 54
. O' z7 M0 K$ r2 y7 p转染试剂的体积 541 @; f2 n: @+ l' c5 ~
细胞密度 54
8 T+ M7 Q2 Z! n& r- B暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54+ @7 t9 W1 \( D: N9 X
转染过程中存在血清 . 55 u# ?- ~/ i# _8 n6 g2 D8 I2 @
siRNA实验成功的技巧 55) G9 s" D( |) w$ l: G
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56" o# @* U( @3 C
影响siRNA效率的因素 56! i- E, M6 n( }
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
1 M1 Q3 ?: v2 v' o& E5 q转染产品列表 . . 57" x+ o, R8 f- f6 s# H7 z6 J
转染试剂 570 {" B* t+ Y6 z% @7 V) ~/ I
Neon®转染系统 . 58
; s* s i2 j' a5 Y' ~9 X0 f) _$ A. ~RNA干扰 58
: R) ], U) N B6 B+ K( C+ E1 g参考文献 . . . 598 \7 K* V4 i6 V. p! Y* p `: T$ K
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发表于 2015-7-9 09:28
