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目 录
5 H& @/ g8 W1 p% p- `8 N转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii- |* r- W1 q+ r1 ?+ u) v- s0 h
1. 简介 . . 1% {9 |! E& J. M% y7 w" o5 v8 z$ M7 S+ ]
2. 转染基础知识 . . 29 y5 K4 O+ a2 H
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2+ [7 H e' d1 X. c2 o
什么是转染 2) Y9 F' f2 R. G( j9 O
术语 2! U% l4 a; r* c& O/ i7 {" J
应用 36 Z( M& H1 \, X
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
, g. q/ n; a8 r" ~0 Z' ~ z2 E3 n瞬时转染 4
! M; F% t t4 ^! ^) O稳定转染 4
! R9 v. v( A$ `4 a选择转染策略 . 5* u1 D5 }- L; c3 N* J/ [
基因输送技术 . . 7
" R P$ m% Q, S0 P. ]% V+ T阳离子脂质体介导的输送 92 S; P+ @0 P% A7 Q+ z
磷酸钙共沉淀 10
( I( r! z7 d; F+ H' bDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11; i8 ~/ S% I. V/ _6 }9 d
其他阳离子聚合物输送 . 12
0 P/ `( C+ a0 e* @$ H# A) v, o病毒输送 13
& M* N+ i/ p2 ^0 h电穿孔 . 14
6 [: b1 u8 ~4 q9 o8 E其它物理输送方法 . 15
9 d/ ^+ _1 m4 {( ]5 f- @阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16# Y* z7 O# K2 Y$ q- q( X6 r
机理 16, L" C2 W* P0 Y6 x1 y4 `
阳离子脂质体转染试剂 . 17
: q" C/ }. G2 u& D0 s4 Y/ i: ~8 T, H病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19+ |0 N' x& T# C& g
病毒载体的主要特点 . 19$ K# m, V) {+ S
常用病毒载体 19; g g+ J/ b3 f3 h3 p2 T- p6 V% Y8 |
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21( u# Q/ R5 k- [
稳定转染子的选择 . . 236 `+ ?4 N- ]* }, I# G& x
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
1 Q d0 @# I# | f报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
# u, k" }1 b7 s8 [) E: p; k转染分析 245 Q) l) n( D8 Z! m& W: [9 ^
基因调控分析 257 n i- Q) v) w
常用的报告基因 257 i9 Z- X% d* G+ C/ j; f
RNAi和非编码RNA研究 . . 262 O4 ^8 c( ]; w
常用RNAi术语表 . 267 D, W, y/ B+ ]! F# ^
RNAi工作原理 . 27, F9 r! v6 C& y! y7 r( ?, z
siRNA分析 . 27
9 I a6 @* h# s: s( l0 K3 F6 KmiRNA分析 28. W8 B3 v9 A5 {# p5 {
选择RNAi方法 . 29
3 K; i9 ?' U- L0 Q3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 307 X# d7 I5 j& L; Z
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 307 y" X) E [+ D9 g
细胞类型 30) ]3 z" `2 a3 D% V% y
细胞健康与活性 31
1 w6 ~6 |# P+ P0 {( O! Q汇合 . 32/ A2 R6 N# \ A7 {* E1 l
培养基 . 32& t: r5 t2 T9 ?7 ?- M
血清 . 32
2 K( j" f7 N, {: M9 ~& S) a抗生素 33
@1 n# P( ` k7 I# B+ J转染分子的类型 33
' L- i A3 B; s/ s" E! [4 b转染方法 33
9 G0 G( w" b7 p0 P( v选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
4 v5 N/ g0 I/ u连续细胞系 . 34
) S$ j; q, H6 H/ f9 o原代细胞和有限培养物 . 35
5 Z2 l; T5 o( E l; L2 D @ v* q选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36/ a; N4 v% O8 u+ V L- _) ?! _
哺乳动物细胞表达系统 . 36& h* h# r0 m2 L! h
昆虫细胞表达系统 . 37
/ G0 Z: W8 U4 K5 V# y/ h6 X质粒DNA转染指导原则 . . 38
4 [7 H7 P/ A: X8 l载体考虑因素 38
1 k' X# M2 k" q; h5 ^质粒DNA的质量 38
/ \: u' w7 D4 T$ G; O: G# o/ R基因产物和启动子 . 39
1 E- ]# `1 E. c! I' u# u+ @对照 39- T! H1 W! |% m# w1 e" N: j# i
质粒DNA转染的优化 . . 39' f$ L1 U6 [& @; y
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
6 C$ D) K4 r5 ~& @阳离子脂质体介导的转染考虑因素 418 v- D: H( Y& F% w% g& r) l' R6 d. e
电穿孔的考虑因素 . 43
! V! K7 l1 X& a4 R稳定转染子的选择 . . 44
, O' e; D. g `, g9 n, E& {3 n* H开始前 44* @/ u7 d0 P6 l! P3 o
杀死曲线 44
& k* l" y b* l: Q& F$ c" j" M选择工作流程 44
) h# y" q( o m0 q9 L选择RNAi策略 . . 460 R2 f2 b/ u# ~1 v& h8 K
siRNA与载体方法 46
! h7 m# l4 ?. ?# c4 `" w非载体siRNA技术 47
" ~( m* n' s4 G1 U, z$ F: V, _siRNA转染 . 49$ M- k$ `8 |# o$ ~1 N) [
载体介导的RNAi . 500 A U, k* q# Z5 E
RNA转染指导原则 . . 514 o$ {3 q- o" H9 w; C, P
RNAi工作流程 . 518 m3 B& U6 t9 F- S
RNA处理 52
4 ^* }" q, U& c: G9 c& f* Y转染效率 52
6 u8 D/ w7 l* P/ x+ ]" Z阳性对照 . 524 T" Q9 q3 c, Z& I6 x) k4 ^
阴性对照 52
8 T1 I8 M8 g- B$ z# q' I共转染 53
1 ]9 h# W0 `4 usiRNA质量 . 53
7 i* I3 u2 M g2 h( LsiRNA用量 . 54
4 t$ v; A5 z5 G- O" J9 m7 r转染试剂的体积 54
5 ~% Q8 { b4 D1 e0 g细胞密度 54
. f+ w+ a* ]8 q暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
. c* {# {2 I7 K2 ~% _转染过程中存在血清 . 55" b; S5 S8 w* ]
siRNA实验成功的技巧 553 _$ G/ H+ N0 e7 B, N
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56. q0 r' z9 B! f6 d( r4 p& `
影响siRNA效率的因素 56
& A3 X i( A- {2 ^附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
0 B7 Z0 z! R: ^, x& K W' M/ M% I ]转染产品列表 . . 575 y; u' T* z0 J4 c. V# A" ~
转染试剂 57
; ?- \" ~" f# T3 e3 r; e6 |Neon®转染系统 . 58
3 W2 D, q& x U. F) `RNA干扰 58
4 p/ F) B& H$ F参考文献 . . . 59
9 _4 }" Q+ {, X |
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发表于 2015-7-9 09:28
