转染基础知识手册——Life Tech出品

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目 录: I5 i% [& j1 ?- z% K3 N
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
' P6 N$ d! }4 b, \0 S# c1. 简介 . . 1
( N5 S+ c6 y% t1 q- q1 z! U% A2. 转染基础知识 . . 28 \5 I8 E% D+ M! A
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2, {& o% r7 p" i# c# x3 I- e. q
什么是转染 2
* F7 M5 o0 J6 i7 X2 q! M% K/ b术语 2. w9 r. l% D! o, M  ^. C* F1 y
应用 3
' r6 o  N/ x4 k" M0 Y$ h* m转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4' I! r& z' Z4 u7 m
瞬时转染 4
+ e0 A% E: R( X* N稳定转染 4
8 X/ B6 U# P! P: ]* M选择转染策略 . 5/ F2 [( F; I$ |- t; M
基因输送技术 . . 7, t) k# a' w) T7 t$ B
阳离子脂质体介导的输送 9
3 l2 J) Y& H' ~& r/ t磷酸钙共沉淀 10% x: @: Q5 u( ]" U, A
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11! F" p9 L6 ]2 e) t
其他阳离子聚合物输送 . 124 W; [( F  r, R# P
病毒输送 13
. m. `/ e: n* n; j电穿孔 . 14/ O2 m  B& f0 A- q7 V! F
其它物理输送方法 . 15& z. J% _' e9 g3 B2 t
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
4 _- K  C1 u. k- U机理 16
% G4 i" c2 E0 R1 L阳离子脂质体转染试剂 . 170 Q* K, E* M6 u4 r
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19: u  ?& w0 y' ]
病毒载体的主要特点 . 19
% P) X9 t3 h) d+ V+ P4 b" e常用病毒载体 19, i( F. J% C( m0 ]" m
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 211 W' O# K- P! J. A
稳定转染子的选择 . . 23
" ^# ^+ V. p9 d/ l: V1 l- {5 B用于真核细胞的选择性抗生素 . 233 B; ^/ {  c9 ?7 s
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24  [* l; ~' o3 P" `
转染分析 240 K- }: S. J3 }" z; Y; l
基因调控分析 256 G+ q2 M) c; o6 U5 ?
常用的报告基因 25# }0 g) h/ ?3 F8 F
RNAi和非编码RNA研究 . . 26, P4 G- _, |: ^! P- m9 L. R& s$ Y6 {
常用RNAi术语表 . 26  H; O/ z3 O3 P. {
RNAi工作原理 . 277 R" G8 x& B" f) }7 y( d$ }
siRNA分析 . 27$ s' j7 Q' g; T; C
miRNA分析 280 G) _, w# P+ x. M' ^4 p
选择RNAi方法 . 29
4 ~% [: {3 v: \: l3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
3 Q0 p5 G& K4 f% F影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 308 T4 {# t% E" A6 j6 G
细胞类型 30
8 G1 @: m: }6 Y: E1 [细胞健康与活性 31% n0 Y5 i% S% C- H
汇合 . 32
& K/ [8 l/ y: o# h4 v: J  ]培养基 . 32
$ B9 [  h- t0 r0 A: i血清 . 32
" P2 e7 Y* u* l1 j2 y/ q) |抗生素 33
' o' d% r' Q" q3 O% h转染分子的类型 331 a4 Z) @* n- H" }" A0 N; [8 y
转染方法 33
' w' L! `( q, Z选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
8 X: j: R8 g% Z2 t- U8 X: |连续细胞系 . 34
/ B. j& U5 \5 T3 Z- g! ~) P原代细胞和有限培养物 . 35
) c# t5 w3 e) ]+ d选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36' m# X8 N$ d6 }( |; z
哺乳动物细胞表达系统 . 36
' Y# W0 O/ e8 {/ U1 U+ a/ `2 F昆虫细胞表达系统 . 37& d; c$ g; W8 i, e8 @
质粒DNA转染指导原则 . . 38
8 ?* u0 |' _; _5 W1 u2 V! T载体考虑因素 382 q! B" Z7 v/ `) V4 n
质粒DNA的质量 38
) D! R1 k, T0 w$ a, n! Z基因产物和启动子 . 39
: L# Q& a" @$ ]1 [" y对照 39
9 r# I$ C# g7 w1 C4 _$ m质粒DNA转染的优化 . . 39/ e/ n6 I, t; @+ h6 ~8 f
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40- C0 g+ K% [( e& {+ E7 a
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
$ k8 ?% ]8 Y, \) J7 ]7 E) [电穿孔的考虑因素 . 43
8 O# X# G2 A" i9 ]5 M- I3 a! x稳定转染子的选择 . . 44; [  B* z7 Z' l
开始前 44
# V) S3 F- B* x& i+ d杀死曲线 44  M% t# H8 D' F( i0 G) L( i
选择工作流程 44/ T) n" \. S6 z9 v  E
选择RNAi策略 . . 46
7 A% h5 @2 ^: H! rsiRNA与载体方法 46; O  d: |% V( [5 B7 N
非载体siRNA技术 47/ s/ p2 L; Q1 }% r' q) K9 @
siRNA转染 . 49
3 U' c- r5 i! o% M/ `5 X载体介导的RNAi . 50
1 E- M; }. ?- |6 fRNA转染指导原则 . . 51& q" N# q0 z) i
RNAi工作流程 . 51
# X0 E9 W+ ]* E9 TRNA处理 525 M% Q5 G4 G4 ]/ K) G$ I
转染效率 529 J4 E! V, d, z! N2 S! w' k( g
阳性对照 . 52
4 ]7 i; P  u$ E: I0 S. }2 P阴性对照 52
9 {% q0 Y2 \# H: o共转染 53
9 u( Z4 E4 A1 [0 ?6 t, a, QsiRNA质量 . 53
: I9 o4 ]" |/ ^' ]% J4 I$ ksiRNA用量 . 54
$ X8 Y" E6 W  B& j7 ^8 ?, t, Z转染试剂的体积 54
$ B5 {9 I5 N: x5 B/ }9 u细胞密度 54: a3 M0 n. q. @0 O& N- i- S
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54  z" s. A. S2 J
转染过程中存在血清 . 55
# A8 F4 t3 Q9 Q) [3 D6 D8 nsiRNA实验成功的技巧 55
5 w% ]0 x5 a- c% s5 fsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
" j* A' a' X* ?% o9 z, V影响siRNA效率的因素 56
% u1 I3 }/ P8 N- T; L- n6 G7 x4 ]附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57) R$ `% p; @; n% K; l; s! X% r
转染产品列表 . . 57
$ S$ x2 M* X9 Q( B3 [* `6 @- {转染试剂 57/ X# A  \( D8 C$ a, \4 `
Neon®转染系统 . 58& a* C& \. k! q$ e# S
RNA干扰 58
4 p+ P. ]4 `5 V( n9 r4 k参考文献 . . . 59) |$ x" h5 F2 q4 b3 ^

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chenlin080102

谢谢

天使心3420

非常感谢

Ernest

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daviddow

谢谢

chuanbaozang

很好的资料，收藏之

xnyyswzl

englishjane

谢谢

强威

多谢了

强威

多谢了