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目 录& y% B. D2 `6 w1 [# a
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii4 q: B: W& ~9 j5 w. j" D% a) L7 X* o
1. 简介 . . 1
@/ F% y/ e3 J' G: K8 R2. 转染基础知识 . . 2* \' ]& f8 T# i/ J5 ]9 r6 T0 F' U* {
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
u1 d2 e+ _4 }什么是转染 2: L% o% N8 M( J2 q# e' k, b0 b
术语 2
' [2 J2 M8 i) M1 ^$ Z1 V' k8 r应用 3
( T5 L6 _. H3 ?1 _$ q) J9 H3 T转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4$ b* ^0 r( B- Z* {
瞬时转染 4. E3 ?, }7 ~/ [5 v& r3 o
稳定转染 4
* l. |9 {- @% F. g, l% F6 }选择转染策略 . 52 y/ k. k5 C# _- @+ e6 k" I
基因输送技术 . . 7
1 e3 X( L8 r: q0 n) Z阳离子脂质体介导的输送 9+ I7 _) W1 }( q
磷酸钙共沉淀 10
) Z0 c" h1 ~8 d& eDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11! o/ }2 n$ O4 n6 Z
其他阳离子聚合物输送 . 12
( Q* H- @+ n* K病毒输送 13+ ^" [/ ?/ v; u/ x
电穿孔 . 14
+ G5 `/ F9 O* c% P; z其它物理输送方法 . 15
4 M, k+ H4 q2 R6 i8 m+ }4 c- w& l: }6 C阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
1 ~2 O2 t3 a a( _5 q) a$ N" g+ |$ D机理 16! X, p" {" J4 ~
阳离子脂质体转染试剂 . 177 D) \% n* I0 w$ L
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19* L$ @6 G1 \9 `5 `1 w2 s) |
病毒载体的主要特点 . 19
- q9 v: }6 m V; x9 i常用病毒载体 19
. c4 G' P9 Z' o* W, qNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
7 d3 u, t; R2 M+ N. |% {: z8 F稳定转染子的选择 . . 23
# i( |; s( M8 B% B( T9 j. [2 l用于真核细胞的选择性抗生素 . 23- `" {( m4 g- V5 k9 Y- F3 Y
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24, w2 G3 @7 @. p5 S, z9 G* k+ ]0 U
转染分析 24, r7 {; C. m9 j# a) w$ C
基因调控分析 25/ p) s% ?; v3 z ^ G
常用的报告基因 25) K4 X; C/ @) z
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
- Y7 d: m. G4 b9 O: e, ~常用RNAi术语表 . 26
8 _$ a' i, T, |) k- h; K& }RNAi工作原理 . 27
7 b) j; I( D# P/ csiRNA分析 . 27% B" L0 b9 L% X! u
miRNA分析 28: P1 Q1 `0 j; Z& r9 ~3 G
选择RNAi方法 . 291 p+ _3 B. M* {
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
0 a+ r. O1 ?9 s+ R w影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
3 _6 O' }/ I4 R. B/ q细胞类型 30" |) I8 z; A0 h2 [ M1 C; \
细胞健康与活性 31
% v, j1 }: u7 e汇合 . 32
0 E& w. q: p, d( Q$ e/ e" {培养基 . 32& Q. B* q: x# z, Y4 p
血清 . 32
4 C' n. b1 R% d4 n$ [2 u: v/ [抗生素 33
?5 ~8 t, r8 n, z H0 U转染分子的类型 33
2 W+ ]& d) [6 t5 w" H6 a) g* R5 ]转染方法 33* Z7 i6 x2 M7 @$ I' Y
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
+ c: L( @+ o4 s3 C3 t. X连续细胞系 . 34
1 p8 M* A$ L0 c; d原代细胞和有限培养物 . 359 r3 Z; T4 Q# L, y$ s4 [
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
# k" m# I' ]; q9 G" o哺乳动物细胞表达系统 . 36
3 V \% s' F5 n0 M昆虫细胞表达系统 . 37
3 { f. l; X& z6 E质粒DNA转染指导原则 . . 38- ^ ]* Q2 \/ n) ~' Y3 P
载体考虑因素 380 F1 F4 y; x1 G; s/ r. g
质粒DNA的质量 387 e1 |8 x( X: ^6 I. w/ X7 }
基因产物和启动子 . 39
1 R: t: @7 |4 s% a对照 39
8 S- t$ f1 D; q+ h# ]& A/ o. @; C( B质粒DNA转染的优化 . . 392 j- u' x1 p3 V% M# h+ Z" E
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 405 S7 [! ]7 _/ _1 D
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41# e5 h) d. x0 G; [* a
电穿孔的考虑因素 . 43
) r# T2 z5 e0 K1 o' O稳定转染子的选择 . . 44
1 Y% z9 u, o- x5 k, O9 \" t+ d开始前 44
, ~1 E# i+ r( }: J" R$ O# ]杀死曲线 44
7 O% o0 _* B. A+ k选择工作流程 443 V; @) `% G/ f* a, X1 I. u
选择RNAi策略 . . 46
( s" d+ f, F4 u1 ]% @siRNA与载体方法 46
, }3 U0 Y9 B0 V+ h6 q9 @5 x非载体siRNA技术 473 X W2 T. V- W, l
siRNA转染 . 49
, `, ^9 {* K7 s" `载体介导的RNAi . 50
0 N. _7 c/ S d! B/ y1 X0 N" jRNA转染指导原则 . . 51
& W7 F2 e5 q. z/ d# \% DRNAi工作流程 . 51
' Z; M7 P" ?3 Z5 d/ IRNA处理 523 ]# ^2 J# ]" O( K) B2 e
转染效率 52
& p0 H2 a4 P1 {6 ~3 P阳性对照 . 52
: M K! A- L5 p阴性对照 52
5 |& S* U9 m; I/ u' B共转染 53
/ b1 g! ]& S1 [' BsiRNA质量 . 53$ G2 _: F5 z5 B2 l
siRNA用量 . 54
" Q. G- k2 c0 ~转染试剂的体积 54+ m1 a( y" D2 Y1 D4 U# R
细胞密度 54
+ _8 f1 g0 b5 i7 F) v: s$ i( A暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54) I% \) s- M& d7 o8 {$ a# P8 T
转染过程中存在血清 . 55
* \% _3 k( R' [. wsiRNA实验成功的技巧 55, l. L0 G l% H
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56# Q( F" t8 l1 ?/ @! o9 S
影响siRNA效率的因素 56
) q- Z9 h/ m2 O2 D, A7 a0 m1 }8 M附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57/ }( a! h7 ?, u2 C$ R9 s# v! T
转染产品列表 . . 57
5 H7 l4 ~/ a# t转染试剂 57
" E Q, h+ v4 W' P6 p/ y# sNeon®转染系统 . 58& `( D. M5 R0 Y/ S2 V+ R& h. v- I
RNA干扰 58
' R6 P' N% e. e9 _, R" O2 k参考文献 . . . 59
* S/ S. O5 j# `( n$ f' Z |
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发表于 2015-7-9 09:28
