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目 录
' I$ a3 [3 y, u, b" y1 m转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
1 {6 ?- b6 b5 P1. 简介 . . 1/ n. h1 L _1 ~, G( l- X% d8 k0 p5 W
2. 转染基础知识 . . 2
0 |) V% h5 C1 e! C3 L7 p+ Q" e$ Q转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
/ X/ I$ l, F9 N5 H7 }9 @9 f' ~什么是转染 2) N1 X) c7 Z: E- B4 J
术语 2, U2 C4 v% _% D+ g' E3 R
应用 3
4 n" j1 Y" @5 Y+ y转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
a6 G# _, r: r7 s瞬时转染 4 a0 _2 d9 f" |2 L+ @
稳定转染 46 n6 W# L! G4 [7 [
选择转染策略 . 50 j& W- H7 V% v8 I0 R
基因输送技术 . . 7% K3 l5 H0 ?% a. m8 M
阳离子脂质体介导的输送 9: B9 A6 s5 J) k7 x* n& \5 \% Q; c
磷酸钙共沉淀 10- g" {+ `* j' N/ D' i% {0 F
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
+ w7 D: l& h5 Q! F* i" k, K其他阳离子聚合物输送 . 12% { s \0 ]! u+ d! D
病毒输送 130 n9 y- Y& ]/ L, x/ L; _
电穿孔 . 14 T8 S# X2 O' K9 H
其它物理输送方法 . 15
* H* r4 [8 j) g: M2 V! K阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16+ R& \, L# F' f$ C# S
机理 166 \- V6 G/ B. t* b# e
阳离子脂质体转染试剂 . 173 N& d5 N, z# v
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
3 k# ?: n6 _8 z- }! r' n病毒载体的主要特点 . 19" F+ H* k' l0 G* r7 T. Q
常用病毒载体 192 `$ U5 f0 I) @9 o4 f" N
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21; B9 Z* b4 U( f& l! [9 t+ u
稳定转染子的选择 . . 23
' S8 q+ V1 }) d用于真核细胞的选择性抗生素 . 23( ]1 w% [9 J5 t! Q. Q) |' `7 B& q
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
3 v2 H }) Y) T6 [. }转染分析 241 @* e% X y5 t. f" G d
基因调控分析 25
3 n7 A8 V# {; g1 r) X; C常用的报告基因 25
$ ~0 r% L8 x0 N, y( oRNAi和非编码RNA研究 . . 261 {# A) C8 k# ]( u: O- y5 ]# e" W
常用RNAi术语表 . 260 a+ R; i$ C0 j: ^* R
RNAi工作原理 . 27
$ O7 B$ I( Y. C+ zsiRNA分析 . 27
/ ^. ~" ?# b6 KmiRNA分析 28+ d! E9 Q. J+ y
选择RNAi方法 . 291 @- v$ Z: b# {0 Z* e; O
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30* f/ l1 g) s! R: z! S; i% M
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 y4 i$ x+ j! A& z _
细胞类型 30" G5 S6 y4 F6 E
细胞健康与活性 31/ J& Y2 Y4 ]9 s9 t
汇合 . 32
+ g- m3 t# E! I& {培养基 . 32
) ]& y0 @6 t7 Q5 X- p血清 . 32# f0 U0 g" _$ W5 e+ F
抗生素 33; D9 w L( k$ b& w" s, H
转染分子的类型 33
+ G# u/ b% n8 T转染方法 33
5 j" {/ `( I5 a选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
/ B @$ ?$ p& Q" `! m @2 z- g连续细胞系 . 342 ]( f6 C( F+ y, R4 P1 r
原代细胞和有限培养物 . 35& r0 B- H- v: \: D( ]
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
6 l9 ~2 k# N+ y' S哺乳动物细胞表达系统 . 36
0 J* X" s' d8 z+ {6 C, q昆虫细胞表达系统 . 37. t8 Z* D- P5 y, X
质粒DNA转染指导原则 . . 38
1 N% o. C' X# U- `载体考虑因素 38
9 \( w2 | z5 T7 O# y% N6 v0 V# K质粒DNA的质量 38( U- X( L+ u/ ^2 {. v
基因产物和启动子 . 39
8 a3 I/ L' y' b对照 39
' v4 P3 C& @ P2 }$ {质粒DNA转染的优化 . . 39* `5 q9 V/ i2 J, b; J _, T
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
- U& {+ d* w8 w$ R) S8 Q阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
! [: a) W* K Q电穿孔的考虑因素 . 43
0 a$ g, Q; U* H; @" j稳定转染子的选择 . . 443 M0 P. i# \# ^ `
开始前 44; i! } ^( q# T
杀死曲线 44: j! Z! t. g7 g Z+ q
选择工作流程 44
0 O6 E6 z, _7 w( `选择RNAi策略 . . 46+ l; q% k& |" h q/ [& W
siRNA与载体方法 466 J! G" C" N, ^% @
非载体siRNA技术 47
% _; J4 k& m/ p" {siRNA转染 . 49
6 A4 p' W; s, C9 a1 A \载体介导的RNAi . 504 ]% ~8 h5 m$ p9 O7 e
RNA转染指导原则 . . 51& {2 | O' ]/ s$ B k0 O' c4 f
RNAi工作流程 . 51
! a n+ Q1 J g# C% J) y$ wRNA处理 52% s' x6 f0 e+ }. ~/ g- J
转染效率 523 `/ t9 B% D* t5 K: w. s& t, b3 Z8 T
阳性对照 . 52
' n5 J' M3 ?5 g8 I$ ^ A阴性对照 52
, X+ ?9 W* D+ G共转染 53
1 H8 q b" m+ q* z/ Y5 d1 ysiRNA质量 . 531 @" M4 X7 D" g% T1 z5 T; n
siRNA用量 . 54
) ^$ z) F5 s4 u8 R. t转染试剂的体积 548 M0 U( g: a r- I
细胞密度 54
# u8 I, T; a, }$ T, h! {暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
' r9 t# F D! X1 L转染过程中存在血清 . 55; O$ z; K) ~: p% L( U$ v
siRNA实验成功的技巧 55
8 P; {% z0 [0 XsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
; a' ]( R% X) |1 I影响siRNA效率的因素 56
2 d' M! ?9 W) b+ R q) {+ z' U附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57) H9 X6 A: g- A' N# J; R
转染产品列表 . . 57
4 _: |3 I% @" j1 Z转染试剂 57
( w; N( |- c, KNeon®转染系统 . 585 d- `# M3 |& V+ {. K' t9 R
RNA干扰 58
, d6 [% q1 {# e3 A0 O- G7 E5 ^参考文献 . . . 59
; D! }' r4 I. ~ d L |
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发表于 2015-7-9 09:28
