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目 录
6 A) p( S; y. x转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
! {& i! y3 R, I# l1 A# K& j: y$ G( y1. 简介 . . 19 W7 H' c5 T0 n; B, H# Q: g
2. 转染基础知识 . . 2
# j5 h/ f* G) B5 B转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2# Y$ Y% x1 ]: q c6 b
什么是转染 2
! o: D& E3 \ s0 A) d L术语 21 m4 ~- b1 H. u q8 Y3 S
应用 32 S7 P- b8 J% Y, s
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
3 w6 K8 F( A* _3 P6 Y* H瞬时转染 42 t. f: I* z2 F" M5 B; S& f- V8 q
稳定转染 4
( H, o& T* D: u" t& m' D选择转染策略 . 5
+ X) E! | e& d8 w基因输送技术 . . 7
3 G6 t* H+ A2 U) ?& d阳离子脂质体介导的输送 9) R4 @' }5 E( J" S; }
磷酸钙共沉淀 108 x0 i+ E+ w; W. d! B4 }
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11# D% r5 i; j# S* i
其他阳离子聚合物输送 . 12
2 U% S, M$ x+ a8 Q病毒输送 13
) Q' x: ?) D7 t1 B电穿孔 . 14# y0 i" w3 I/ ?# ?% a
其它物理输送方法 . 15
" t4 |/ _; u0 ?* Y4 k阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
9 a! k! a9 a& a4 f, x机理 16 }$ q" o* a, ^, \6 M+ F
阳离子脂质体转染试剂 . 17
+ n# K0 R6 p' X& g病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19. U3 H/ \9 p, N
病毒载体的主要特点 . 19* a4 H3 p/ ?6 O! W. v' D; X q
常用病毒载体 19
1 _8 I1 k, R7 t4 v& i( u+ i$ \. K, dNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21* Z& y1 V% P/ J- u/ D- ~$ C
稳定转染子的选择 . . 237 [$ l$ Z( _3 g+ a
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23! x- ~ O! z2 _, |1 B' ]9 p0 U+ m
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
8 O# {3 Z0 a- m6 U! [6 L$ N' R6 ]; f转染分析 24' D. }" P% H$ M* x- z
基因调控分析 258 \2 [9 J! q& k6 Z& O
常用的报告基因 25& l* Y( `4 O* f/ ~
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
/ x P' ?* l* j$ E- Y' K+ q% ~常用RNAi术语表 . 26
! N! j2 f9 s* z6 `RNAi工作原理 . 275 h, o# G8 a5 U0 b7 Y
siRNA分析 . 27& c; q7 T/ z4 r6 l2 ?
miRNA分析 287 T9 e i- G, y* ]9 b
选择RNAi方法 . 29
& Y* F; _% Z; v$ {% d& d* `/ B3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30$ ?" }* B2 M3 f. ], y. a
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30% [& b0 c8 V1 M& K* T
细胞类型 30* S- q' r3 u) @+ v' p% L( Q7 B9 ?
细胞健康与活性 311 P9 z# Y, O7 `- P/ [
汇合 . 32) d2 q. F9 n3 Y* z ]" r: {
培养基 . 32' X) }$ ]) B& d+ K$ V( _7 u" d
血清 . 32/ e, R, O+ B0 F3 ?
抗生素 337 [: T$ W" ]! H7 u% M
转染分子的类型 33/ l/ H) r# i: y& o" q
转染方法 33$ Z' l- Y* e4 U- N
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 342 z% C! z$ F" d5 @! j) U
连续细胞系 . 34
# Y' _& \ z4 k* I% @6 |原代细胞和有限培养物 . 35
4 l4 ~% C. D# s& G4 i; I5 E选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
% E3 A7 P6 J8 v$ ~9 w哺乳动物细胞表达系统 . 36
, d% H3 e; H/ X昆虫细胞表达系统 . 370 C1 C0 ?- O* [) `. G
质粒DNA转染指导原则 . . 38: I% ^2 K) Q2 ^( G* z% q4 f1 {
载体考虑因素 38, `& R5 e& ?$ l
质粒DNA的质量 38: x8 M5 _$ L$ o4 v
基因产物和启动子 . 39
$ e9 T) H: W$ Q2 n8 q对照 396 l7 `: B" t* B$ V% G# V- s
质粒DNA转染的优化 . . 396 E$ N# F6 J, a, k: D
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
9 I" u! d5 E+ `8 w& l+ s阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
* W* E6 S( e. D9 {0 Z电穿孔的考虑因素 . 43
" ~! n# U7 D/ L' O" O* z稳定转染子的选择 . . 440 E7 r9 h6 {) t: v
开始前 448 z+ m, }" M0 P @. s. B
杀死曲线 44
H/ Z' }, r9 ]8 ?选择工作流程 44
: v6 d1 W4 C+ ?/ f- R选择RNAi策略 . . 46% s3 |$ ~( u4 g# q
siRNA与载体方法 465 V* H0 V. u A/ x4 d2 e8 w
非载体siRNA技术 475 i4 _5 o5 F' ^1 }, e( v
siRNA转染 . 49
! m: s: Q4 b/ M6 P$ P( K载体介导的RNAi . 50
* A W* g9 [$ rRNA转染指导原则 . . 51
! G/ ~. j& i3 ]9 NRNAi工作流程 . 51. ? u; p" e- z$ u- T
RNA处理 52' h0 C( k: q) I/ F
转染效率 52
' J5 A0 Y3 j7 _7 p5 w( @3 g8 G/ E8 @阳性对照 . 52
' H" B5 ~- o! v$ U' Y1 y2 o4 i( S: h阴性对照 52( [' J9 n8 E" E& E
共转染 53
8 K! E! ]4 y$ j9 f" T, ^/ ksiRNA质量 . 53, j3 x, @% \6 z+ a/ n* [, A
siRNA用量 . 547 ~. ]: b. W6 i( M
转染试剂的体积 54) |$ n( h* X2 I8 a( y; a$ l' v
细胞密度 54
8 [0 F! E& G* L暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54' _0 L/ Z/ u; |, s$ K
转染过程中存在血清 . 55/ v0 F9 ^2 w8 y$ I. W4 W
siRNA实验成功的技巧 55
1 c, f4 I; X/ o. B; Y( wsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 561 }5 H/ b8 a$ ^+ q3 Y4 V
影响siRNA效率的因素 56% {! B' f- d/ N9 Y# Z
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57. Q' x& ~, [7 U
转染产品列表 . . 57
2 N, l d# W! z8 T; G7 L% [0 |6 K7 ^转染试剂 57
* v% {; k5 @) j6 R0 l5 L& eNeon®转染系统 . 58" g/ f# L: Z5 C, P
RNA干扰 58
+ }1 z/ l, o9 |+ F' |7 C参考文献 . . . 590 j" ?% M; R( Q& |! l+ }" C2 x
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发表于 2015-7-9 09:28
