转染基础知识手册——Life Tech出品

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目 录
0 A( u1 k$ S: G7 Z; U转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
4 X( s2 n7 c/ V  O' w1. 简介 . . 1* w, _7 X# n9 I' A: R; R
2. 转染基础知识 . . 2
2 p* h1 k- d8 B$ ?# v转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2- t0 r/ W4 j5 a$ i, v+ p3 e# }7 M
什么是转染 2
- M/ H6 o" f# [2 N7 C* c术语 2
6 |. |1 m& w, d. {# ?: r- F应用 3
2 O1 s7 ^3 U2 W* G转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
' I' t. {; m% o# R  @瞬时转染 45 D$ N6 U" M6 Y- q
稳定转染 46 H( R# F1 N3 g. @. h2 J9 G0 J. L
选择转染策略 . 58 F7 A% }8 {5 J( E* @; {- e+ G- Y
基因输送技术 . . 7
3 Q* ~' w) }5 p( Q# l. ^, \阳离子脂质体介导的输送 90 T* W- c7 t# L# A6 I0 g) C- p
磷酸钙共沉淀 10
, s+ c1 s4 x7 Z! ?DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11) k8 I4 j' a$ s: |0 A& {
其他阳离子聚合物输送 . 121 T! R7 R0 t9 M* L% e
病毒输送 13- y0 `( K3 {' E! P1 p# B! T
电穿孔 . 14% Z8 ]9 @5 U# `
其它物理输送方法 . 15; U+ H& F+ w+ y+ H$ P
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16) T# z' U0 U# b' m: E6 h" [
机理 16, w- Y$ j+ j) _; Q& y6 `
阳离子脂质体转染试剂 . 17
6 t; F. e5 {( D1 i病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19. h6 H" f" W+ T4 I) o  }/ x3 U
病毒载体的主要特点 . 19
5 E# v/ h( b; ~8 R3 f# P( t2 J常用病毒载体 19; _( o, K/ v# x% l$ x8 {8 b
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21. x, V* D: u5 e% ]# F' r
稳定转染子的选择 . . 23
$ |* Q; h! f! @5 t! @8 u用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
2 h- k8 d) j$ F报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
  q* b5 G) y) p转染分析 24! A9 E$ ~0 a1 U. i0 x
基因调控分析 25
) K3 S1 x) ]* ~( ?. g( y+ Q8 p5 u常用的报告基因 25% _+ n& t! x9 L: B2 C
RNAi和非编码RNA研究 . . 26- b! W2 T; ?2 f
常用RNAi术语表 . 26
5 b: P& \' t, v- jRNAi工作原理 . 27
/ G1 d' M5 g- KsiRNA分析 . 27: k1 m3 |- L! g) Z, M
miRNA分析 28
( N9 _0 D1 t! I+ n! O: z7 g6 s0 W" @选择RNAi方法 . 29! ^# p, j; P8 l7 l
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
. O1 [. Q; u  t/ Q9 Q# V6 b  J$ x影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30, E% @, c6 Z3 |) H4 R! w
细胞类型 30" k7 J9 E) h! W0 U* y
细胞健康与活性 31$ q3 q" I0 k. h5 R' N. B1 W
汇合 . 32
# X8 I9 C; z: B1 J" k2 I- U培养基 . 32; A. ~; h2 L9 U% }. i+ |; z
血清 . 320 B, F2 ~0 P4 p- A% o  z! ~
抗生素 33
7 |' z. ~0 r8 Q转染分子的类型 33& {8 R# @+ H1 o0 O& P7 j6 B) Y' B
转染方法 336 y8 @7 a0 W" d# }: }1 S8 e9 e
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
1 B1 e! n/ q: d& Q9 G7 x7 B连续细胞系 . 340 c, f0 j& I6 |; y7 X* q% c1 I
原代细胞和有限培养物 . 35
$ E2 m+ c; w4 l9 F) ?& K% _选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
' a9 \6 O6 l, r  }哺乳动物细胞表达系统 . 36
9 N1 j2 S. T1 n3 t; w昆虫细胞表达系统 . 37
. I2 U. r' H+ P1 H: y  o! O+ d# J7 t质粒DNA转染指导原则 . . 38( C' Y) _$ g5 y% `
载体考虑因素 38' Y9 k( w8 ?. d2 a- S
质粒DNA的质量 38$ s# S$ u. W- w7 [- e( i; t
基因产物和启动子 . 39* b" J7 P, @4 K7 ^& z
对照 39; s' G9 S# ]# `( {# [/ v
质粒DNA转染的优化 . . 395 G6 Q' }) M% G- l6 S2 C( F' K
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
, n/ G0 v7 ?" k$ G; |. e( c阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
9 I" M0 ~8 F. q' [  N, n电穿孔的考虑因素 . 43
2 z% i3 B- h3 i5 {( u/ h& l稳定转染子的选择 . . 44- h' v/ L/ @6 s' L6 ]& e( p
开始前 44
7 r* i! R" j6 R* D7 w杀死曲线 44
2 F; |  u" W" ]0 b0 u1 C选择工作流程 44+ t( }/ w+ B% {4 x
选择RNAi策略 . . 46! q- q& y2 W3 ^/ r9 C
siRNA与载体方法 46+ r( G! m. M9 {4 d4 `
非载体siRNA技术 47
* T$ v3 Y  B' A- V; G3 ~* I- _siRNA转染 . 49
$ C. W4 c3 j5 G+ l. w% U# s# q4 U载体介导的RNAi . 50
5 ?0 W! K# t; W* B- HRNA转染指导原则 . . 51/ k) P# A* k+ J* f: Z& F
RNAi工作流程 . 51
6 |) g3 B" f  nRNA处理 52
9 H1 I# ^: g1 V8 n转染效率 523 a! C% ?' h) s! T; u" w7 K
阳性对照 . 52
- B  {! ^: }- j2 i阴性对照 52
2 Q$ j; Y" b4 C/ y( L5 b$ t8 c; i共转染 538 z9 @, H* X) o0 D) }3 h
siRNA质量 . 53
( `0 t* Q* f8 ^# ~9 \0 EsiRNA用量 . 544 z% P/ V5 O0 e: L, J: U! s
转染试剂的体积 54, g; _, M0 p9 {
细胞密度 543 k/ M1 Y2 _. F
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 545 B2 L( z0 b( u. }8 |% {
转染过程中存在血清 . 55
/ H. u: U! [7 g* D0 V% M( H0 zsiRNA实验成功的技巧 55; H; ]0 ]" u8 @6 s7 L/ D' U8 h
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
9 h2 \6 d0 U6 K# d. m影响siRNA效率的因素 56
' B* L& p) [5 P! @8 i附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
) U9 ]8 ]# {2 ?转染产品列表 . . 570 @2 {9 Z3 n$ b! j/ R
转染试剂 574 z: I' H8 a4 ^' S  O0 i: V
Neon®转染系统 . 582 y/ h) e1 x) G: F
RNA干扰 585 d! V  l  V2 B, p/ R
参考文献 . . . 59
4 F0 \6 p" X8 w* {) N+ [7 D

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chenlin080102

谢谢

天使心3420

非常感谢

Ernest

谢谢分享！

daviddow

谢谢

chuanbaozang

很好的资料，收藏之

xnyyswzl

englishjane

谢谢

强威

多谢了

强威

多谢了