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目 录6 e# P3 r1 W0 r3 ?) j, B: O
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
% s8 a7 F+ O- O! @; @% o d1. 简介 . . 1+ L- s( m) C7 p, _
2. 转染基础知识 . . 2
9 n/ C' ^% Y0 j3 \3 ~: W转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 ?4 R/ z* e4 D, r4 Z
什么是转染 2
: c% ?0 J; R" G1 u' ~- g术语 2
l( x9 X7 L' g应用 3
6 x T9 H1 Y9 ^转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
1 ~" R+ I: `2 n0 x- K; w瞬时转染 4( U2 I: U) L* j4 ]- r' l
稳定转染 40 ~$ W2 W R f2 r/ u5 V
选择转染策略 . 5
/ B" Y/ T% d! ?; a基因输送技术 . . 7$ M" O# Y* c$ B
阳离子脂质体介导的输送 9 e; j! B& @0 H, x0 a& N7 ]
磷酸钙共沉淀 10, A- u/ H% J% [+ s9 R
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11' j' D* ~5 _" L+ `7 i
其他阳离子聚合物输送 . 12
# \+ g7 M2 b2 w8 x& k4 N病毒输送 13
+ K( m U3 |; Q电穿孔 . 14
# v: P1 i" U; S其它物理输送方法 . 15! F3 o' V3 R9 d& [2 |
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
7 |$ U6 C& \, {' A9 s/ P9 T& V0 ~( g机理 16
. Y9 {5 ?9 z9 s4 h: N阳离子脂质体转染试剂 . 171 d! M, y4 S4 k$ o6 ^2 ~& r$ y
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
3 l3 I* `& ~8 `! s9 x4 ^病毒载体的主要特点 . 198 T! G5 F4 M3 T( Y T, Y
常用病毒载体 19 R/ c8 g* I& x' N* g8 Y
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
1 n5 r& T) i( G! a稳定转染子的选择 . . 23, G7 ?6 z0 `9 n! y, E i
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23! J; m4 J3 d1 n+ A, a9 e
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
1 f" i4 n& D2 b- N转染分析 24
0 ^! O+ v, u5 A- Y \基因调控分析 255 S D8 s0 w" q) L# ]/ O" o1 s3 r/ r
常用的报告基因 250 J. ~; }5 R1 f( C
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
- W) h6 a/ [6 \常用RNAi术语表 . 26
0 l( g$ d+ b! h; d- e: mRNAi工作原理 . 27, x9 W+ J0 q' w, A0 p0 N8 l0 `8 g) E
siRNA分析 . 27, o$ t' `: V4 C1 a
miRNA分析 28
% o: Q5 a! e) C5 v9 ]选择RNAi方法 . 29
" ?4 O' D9 h/ K/ C" [ O3 Z3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
3 _. X$ {4 Q+ J# f/ S: |影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
' x$ j( `# I% x- ?$ l, s: S8 E: u1 @细胞类型 30
. _: Y- }. z" S3 w+ B细胞健康与活性 31
9 ^" z: b& H; o' Q8 Q# U) B) T汇合 . 32- _- z& [1 \; `! Q k
培养基 . 32
" Q' i; o" [+ f$ A F8 W! C血清 . 32: D8 j' W& R- T$ j
抗生素 33
- s% U+ C7 L1 {* c/ H9 W* f" {' p转染分子的类型 33' C3 y" s Z" ~3 H+ a/ c7 |
转染方法 336 X2 f5 z3 I* G# K; C6 _
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
& P) A% |+ d3 ^6 L% w; @连续细胞系 . 34
! G1 {! h) p6 Y原代细胞和有限培养物 . 35( X/ i2 ?. w' {- [ v1 T
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
f6 j1 F4 r/ B/ B% `哺乳动物细胞表达系统 . 36# }& g8 ?! e/ p }* E
昆虫细胞表达系统 . 37
' U/ U: N3 u3 W# o+ A2 Q" T% N质粒DNA转染指导原则 . . 38
( m6 M. o- G5 q1 }0 }; m载体考虑因素 38& y4 [( A- j# A0 d( Q) i
质粒DNA的质量 38
) Y `0 j# z& s; w& x基因产物和启动子 . 39* ^% P) p' w# @7 b, e
对照 39: {1 e+ h4 k! \; J7 V
质粒DNA转染的优化 . . 390 R, g4 N! ]; R5 z3 _: @6 \% R
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40$ m" |$ r3 S- u7 `+ c8 p
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
! c8 p9 w/ Z& k4 b+ v. \电穿孔的考虑因素 . 43
! t( O" X! F$ { P3 V稳定转染子的选择 . . 448 b8 X& Y: R( q9 r) C
开始前 44 J0 o' h4 v4 L4 {0 d
杀死曲线 441 b: M9 P/ |- }2 E
选择工作流程 445 j: R5 E8 |! w, G& x' ~0 N
选择RNAi策略 . . 46. D2 v) A8 ]9 |
siRNA与载体方法 46
7 U4 q! |. d+ X0 @6 g5 g# o非载体siRNA技术 473 C2 b3 M1 X0 N o3 N# P. k; o. D
siRNA转染 . 49
$ _7 g6 A' a) A; p( Z0 y3 a! d载体介导的RNAi . 50: | M* N- }* X: v) p8 d
RNA转染指导原则 . . 51; n% B. F& o# f/ X; k- p
RNAi工作流程 . 51
! y7 ?. x9 @& n: ^0 |RNA处理 52
; Z! m! }+ \' S( M转染效率 52
% ]$ \- M2 Y3 c! a阳性对照 . 52
0 a. R1 Y, V0 U6 ]阴性对照 52; T$ z: ^% a, U: ]; q5 `
共转染 53; t+ T5 p6 k, J1 i! l
siRNA质量 . 534 ?) a# ]$ t9 J7 _& F) B& \
siRNA用量 . 543 s8 ^5 S7 I& @7 J! O
转染试剂的体积 540 l% |/ R; J1 }7 `* `, n5 M- n
细胞密度 54. W4 }" C- R, a' ^
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54( V; ~1 S! |- x
转染过程中存在血清 . 55
$ g/ n( o& ^- U% A5 v ssiRNA实验成功的技巧 55
) g6 H8 O8 k" {9 D! ~# {siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
+ P' ~2 \0 d+ Z3 }7 o. }1 F影响siRNA效率的因素 56& W; `0 N1 @* E2 ~; B' C
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
1 P- f% b8 _$ y- S转染产品列表 . . 57
& ^1 Z$ e9 b8 G g转染试剂 57
) v. E; U# H5 X/ V, O2 jNeon®转染系统 . 58
; d# J2 J* R3 hRNA干扰 585 ^) X* t! L8 }0 E( V! F: ]
参考文献 . . . 59# O) r# }4 u% Z# K4 d
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发表于 2015-7-9 09:28
