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目 录" |# y8 G {! z# h
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii( N$ u( F4 Y$ O' S w. c! u9 q
1. 简介 . . 1! k* |" A7 i* D# _. N0 C/ ^
2. 转染基础知识 . . 2# r( \' \6 F- I3 Q+ E
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 K0 k4 a. m/ M! E( f1 X
什么是转染 2 ]# ~8 T8 u2 U) U3 |* ~1 `% ^0 p
术语 2
4 I7 j! i( e0 \9 _- K应用 3
4 {. l: Q* |; u% y# v# X转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
( `; S- d7 z" P- u8 g1 l瞬时转染 4
; H7 X9 q. z" I7 M% ~0 r2 i稳定转染 4
0 Q( L' Y) J: J Q选择转染策略 . 5 C0 a; q- ^2 s/ C+ q5 ~" u, S
基因输送技术 . . 7! k! S3 R5 _1 K( m! k; P
阳离子脂质体介导的输送 9
* n" t# z" q! V磷酸钙共沉淀 10' m# t; i, |" _
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
3 z& @- m- @$ }4 H, ?: l其他阳离子聚合物输送 . 12 _5 }& a9 m/ t3 S
病毒输送 13: ]3 \0 C8 H6 Y
电穿孔 . 143 \9 s b2 }" ], h0 e
其它物理输送方法 . 15" _( S& r. B, N) D. T: ?+ n7 ^
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
2 _& i Z) Y0 ~; T/ P机理 16
$ m$ ?3 }. d" T U4 P阳离子脂质体转染试剂 . 17
, N6 i+ `: A+ z# S病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
6 _0 F" t# \8 K4 q s% f病毒载体的主要特点 . 19% }8 h) i0 @8 u* j+ Z% V
常用病毒载体 19. w6 {2 J5 l, v: Q. o4 N& ?* p
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2 P) n1 B% {& O5 Z+ }2 e稳定转染子的选择 . . 232 ?& u4 S# u! a9 j2 }$ B; Z
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23: L, A" a1 l0 a
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
5 E8 d, u! x6 P% f! c$ o/ D转染分析 24
; Z5 ], H5 d+ r- p' J m: w# q基因调控分析 25* p& E' \4 |+ T, ?% K
常用的报告基因 25& s/ ~4 u+ C) t3 \* j( ?3 U
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
4 W+ n6 M( S0 b" E常用RNAi术语表 . 26. S8 _# ~. H; B2 P1 Z* \
RNAi工作原理 . 27% ~8 F! x1 a3 c
siRNA分析 . 27
) `; |/ `, K$ x; D5 ~: |miRNA分析 28
! Z- K5 v5 u4 f( U& R选择RNAi方法 . 29
6 l! [' d: r# E: ` P3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 301 B# F0 N: n0 q$ q; A
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
0 X! P; w+ X& g( |( r9 a) S细胞类型 30
) n# ^4 z) b+ o/ j& d细胞健康与活性 31
( W, Y" H* |2 b: S7 F& J汇合 . 32
- j4 D0 x& J5 B) A0 G' \培养基 . 32
7 a% j5 M `/ u血清 . 32. m1 d$ L$ T: ~3 f/ X& H8 q
抗生素 33
7 {& f' h& g- f9 F* J6 ^转染分子的类型 33
( U0 E5 [! O# |: ?转染方法 333 ?5 W5 x( M$ r& I5 ^, k
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
% h; `. `4 g j. V; O$ Y连续细胞系 . 348 Z f( g. p$ R, d+ s
原代细胞和有限培养物 . 35
/ C! x, r% Y; y c- a, D! j选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
+ |# n' t4 Z7 _0 F+ j- J! l哺乳动物细胞表达系统 . 36
2 x, h/ R5 S: \* J$ R: O昆虫细胞表达系统 . 37
8 E1 I4 Q T! x9 a质粒DNA转染指导原则 . . 38# s% g4 S! Q, P- N6 t* J3 `1 R
载体考虑因素 38. \ S$ a) v+ G& O* S; W+ x
质粒DNA的质量 380 D% M3 J1 b' h. ]; X' Z
基因产物和启动子 . 39
6 R) o$ q$ v8 I( \, [ y对照 39
, e4 r2 w) W! P1 Y* S% ~质粒DNA转染的优化 . . 39
$ o4 ?) A: v5 j磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40: P6 J' a2 n6 ]" _) Z# s" t Q9 l
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
, R) ?6 H# l1 r" O5 x0 o% F电穿孔的考虑因素 . 43
% B/ E1 T2 Y/ v. ]- v) @稳定转染子的选择 . . 44" k) N- V0 p9 X- G* }
开始前 441 {" Z1 j' ?8 T ~
杀死曲线 44
4 \0 b' [' ]# X* V, q0 ^6 G选择工作流程 44 {1 g/ j" H r
选择RNAi策略 . . 46- t! ^( T7 R+ Y
siRNA与载体方法 46
3 Q5 m2 E- x( E' w非载体siRNA技术 47
6 S7 |1 |8 j# Z: Y# ]1 NsiRNA转染 . 495 a: E0 t- c, L0 }3 R
载体介导的RNAi . 505 }- P" w e* H% n: F3 }/ K
RNA转染指导原则 . . 51; n `. T! M$ m8 j9 n! e- O/ a
RNAi工作流程 . 512 b* o T) \! u% R. D1 n
RNA处理 52+ f! p; g! P# Z
转染效率 52
; W3 j; V5 A. b" f Q; J阳性对照 . 523 G4 C4 R# T( Q# G, z" E) u3 c* R1 n
阴性对照 52
' }$ C0 i( f+ Z3 ~9 ]共转染 53
. w& F" B; v0 t M BsiRNA质量 . 53
8 K2 V+ _# e$ y. \# E) g9 asiRNA用量 . 54
, M( h. @% {# a$ z y$ U转染试剂的体积 54) r1 D, @: d3 }+ Q! }
细胞密度 54) u- I* k6 b/ d
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
* Q" X6 U+ h9 h转染过程中存在血清 . 551 B' ^& q& X) a* M9 T$ T- L
siRNA实验成功的技巧 552 I5 |3 P9 B$ ^1 u$ O- x
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 560 d! x x$ G9 \
影响siRNA效率的因素 563 p/ k* g: E' \& N3 S
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 573 O1 J% m9 q* ^! c; \$ e( y
转染产品列表 . . 57
! w; X7 Q' e) }8 w% g. r转染试剂 57; I7 h; x ?3 _8 ?# G7 m( e" u
Neon®转染系统 . 585 m$ }) ]8 S# K# U+ f0 ]: I
RNA干扰 58" K! { Y- `" {) y
参考文献 . . . 59
: A! I4 v3 J5 D' _' I |6 b0 s |
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发表于 2015-7-9 09:28
