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目 录
2 F. O8 h9 o0 H, W1 o( a转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii- @5 q6 o9 v( v% I: k( s& q( e
1. 简介 . . 1' X9 m2 Z \- w: o( J/ x0 j
2. 转染基础知识 . . 2! ]6 `! s/ s0 y& E( ~$ T* L
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28 B6 J$ [6 _: q1 o0 m O0 j
什么是转染 2# P) w- z2 T& F' ^7 [) u4 o
术语 2
2 i7 z q4 |+ L0 _6 v5 d4 ~% v4 n应用 3" ~9 Q! ?( N) @0 F/ _5 R" o) B1 L# @
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4) e0 Q& B* a$ i, w. g9 U5 n# T
瞬时转染 4
' r( K5 o7 U: b g, g9 T稳定转染 4$ I7 R9 X: D7 c+ t
选择转染策略 . 51 I3 m0 u9 y- Y& X0 ^0 G0 i" l2 t
基因输送技术 . . 7 k5 \1 G7 c5 H6 l6 J |- f
阳离子脂质体介导的输送 9
: q/ W' s9 M8 A( S磷酸钙共沉淀 10
0 M9 X! v- p& aDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11; K. J$ J9 x" \, ]: H
其他阳离子聚合物输送 . 12. s! y5 X( [7 o1 u; W
病毒输送 13
$ Q- h3 f5 L2 G9 d! k电穿孔 . 14
) `" m5 w* b" W/ f其它物理输送方法 . 15" v) m+ a: I6 h
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 167 p$ A! w9 B1 C2 C( Q, l
机理 168 G# ^0 Y8 Y* Z7 P5 j2 J9 q: r, a
阳离子脂质体转染试剂 . 17+ n4 h! A3 i3 t+ c/ G6 Y) U6 `
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19& `' Y7 a" j- S4 m6 U" j% g
病毒载体的主要特点 . 19
4 B- W, l- c3 ?常用病毒载体 19
; O, R7 U5 D, K( hNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
; d- k* R+ t) H: I% G稳定转染子的选择 . . 23
: G) ]8 g0 q( b$ k. _ k) {- d用于真核细胞的选择性抗生素 . 23/ Y; K( D: P. E+ n+ U4 |
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
" P: e- K2 S: G; |7 I转染分析 24
* z3 ^* l# h w9 p基因调控分析 257 f) J& Z o: v
常用的报告基因 25
# N: T7 S: L$ q: Q" H, }' c% \+ zRNAi和非编码RNA研究 . . 26/ d# H+ `/ b# E2 q3 t! J
常用RNAi术语表 . 26$ u4 y9 C8 ?; S( A
RNAi工作原理 . 27+ n. Q0 C( r9 K/ y3 O
siRNA分析 . 27# l& e7 T5 f; B: i
miRNA分析 28, ]; I5 V1 z5 ]( w
选择RNAi方法 . 29. d' i: n( P- b, z$ f" F* m
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 304 b) i% O, c) F2 y* `- g; b& f3 I
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30" d8 g; O( U4 @& j
细胞类型 30
: q, m7 f x! z# [细胞健康与活性 31
( L2 X/ ]1 @" R! t! y1 }8 X) ]" ^汇合 . 32
; O& r, P# _/ i: g' z2 x, b6 H培养基 . 321 a4 P# T0 a" L6 O7 @% Q7 f
血清 . 32: B" d, H& M) Q! \3 R h
抗生素 33' {: C! z0 T8 N4 z9 {+ q
转染分子的类型 33( e0 m- u; E) \$ R' ]# [" I. |
转染方法 337 b& a1 i( [* _# `+ q3 s
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
- }! M. }5 O L7 s- M( r$ B6 p* b0 N. u连续细胞系 . 34
! G1 W! f5 m9 E! y: s原代细胞和有限培养物 . 358 s9 u# l7 \3 @1 W) O' e1 |
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
$ w/ p; [$ q5 m2 A3 r0 T! y$ i0 s哺乳动物细胞表达系统 . 36% E0 L+ u& u1 G$ B" l6 F# t) U% y
昆虫细胞表达系统 . 37. B/ d# Z) A8 [; e5 d
质粒DNA转染指导原则 . . 38
: o" w0 X0 U( \% d载体考虑因素 38
* ]- v; r D" \- \质粒DNA的质量 38
0 }6 {5 ]/ r5 G' O+ g基因产物和启动子 . 392 i, M/ X9 l8 q4 l4 B* l. l# S
对照 390 y) l1 _; h# r3 _
质粒DNA转染的优化 . . 39
: @9 ^4 }" E" D磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 403 T% i5 Q+ W* w) ^
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41; X2 F" @& i2 l
电穿孔的考虑因素 . 43
* o1 b* w& T" z; o稳定转染子的选择 . . 44
P( T) |$ ?. ?, P* g- P8 _开始前 44
% F$ @& R( f7 A% X/ p杀死曲线 44
5 O% d% c2 h9 A5 Z) ]; Y! x R选择工作流程 44
8 F* g: A3 u- X S8 R选择RNAi策略 . . 46$ `8 _0 u' q. C
siRNA与载体方法 46
6 K4 M( Z0 R! J3 c2 f6 |非载体siRNA技术 47: W. a* H, i* _( K
siRNA转染 . 49+ @* H( v/ e" N
载体介导的RNAi . 506 i2 M9 O6 H1 B* Y% j7 g, K
RNA转染指导原则 . . 519 U4 }1 Q* N6 O6 \# u2 Z4 j
RNAi工作流程 . 51
Q0 i' q. c3 A& C1 z' Y' Q: gRNA处理 52. s4 b8 I) g# A" h% T! _
转染效率 52' C3 D, n; h0 U
阳性对照 . 52
5 i* [# k# s: Z2 O阴性对照 52
: Q3 s3 o: p3 z; O共转染 53
b6 {) `+ e8 QsiRNA质量 . 537 g9 ?7 A+ x I2 `: X
siRNA用量 . 543 o: P9 I5 S, N
转染试剂的体积 54
) I( i5 z/ a4 h2 @8 G细胞密度 54% a5 D" A6 Q4 I' n, q7 a5 B
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
# @% P. \% V' \4 ` \转染过程中存在血清 . 551 e2 G$ C7 v1 @6 R9 S S% x" b
siRNA实验成功的技巧 55
3 y. `' h- P( msiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56' Y" X. ~1 @- t% z4 ^# a3 _7 ~, f
影响siRNA效率的因素 56) [+ L8 {+ ?; _& t
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57: G) z X, D$ }8 L. I7 h& U) D
转染产品列表 . . 57
1 W8 }7 {: D0 ~$ a$ ^8 D2 {, ^6 c9 e- b- Q转染试剂 57
$ F) a& F5 t% K: j T5 cNeon®转染系统 . 58
' j3 M8 p$ F: J) d$ K8 ~. w; VRNA干扰 58
$ K$ {) V. r t- X2 f参考文献 . . . 59, u- V% I C/ e5 U
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发表于 2015-7-9 09:28
