脐带间充质干细胞难以消化

chrindy

       之前自己取脐带提了脐带来源的MSC，在培养皿内当一个克隆密度达80左右就开始消化，因为以前消化MSC用的都是0.05%的胰酶（含EDTA），这次也是，但是发现MSC很难消化下来，最后能消化下来种到培养瓶内的细胞数目比较少，不过细胞状态比较好，也能长起来，后来就改用0.125%的胰酶（含EDTA）进行消化传代，发现还是需要比较长的时间，是因为我的细胞状态不好吗，还是说脐带提的MSC本来就比较难消化？

老姜

脐带MSC很好消化：
1 Y/ a3 ^* h7 k    当细胞生长汇合约85%—90%时，用PBS洗涤两遍，10cm皿中加入大约0.8ml的0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA，放入37度恒温箱中约3-5min，取出，用掌指关节磕磕皿边，细胞自然脱落。将细胞移入离心管中，低速离心后，计数，按一定密度接种，3天后半量换液即可。37度是酶作用的最佳温度点，EDTA的消化作用因无法终止，常用离心的方法去除。也可将消化下来的细胞直接加入约10倍以上的生长液中，直接培养，次日需弃去上清液。加入新的细胞生长液。

baby00000003

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个人经验，死贴的细胞都是状态不好的细胞，比如密度过大长出叠层的或者换液周期过长的，脐带MSC即使放在室温消化，有个3mins，再敲敲就足够让它漂起来了。（用的是1X trypLE，gibco）$ H+ u: T7 a  w" u- }7 [
用PBS好好冲冲，也许是因为血清没冲干净不好消

蜗牛爱贝贝

间充质细胞干细胞用0.125%就很容易消化下来的，你确认下你消化的实验步骤，是否用pbs或者盐水冲洗了，胰酶用之前最好在室温放置20分钟到30分钟内，再有就是在消化时，用手摇晃培养瓶，如果确认操作没有问题，那就只能说明你提纯的干细胞不太纯，可能有上皮细胞什么的，还有就是如果3分钟消化不下来的细胞，就不要再纠结了，不掉的很有可能不是需要的干细胞，为了一点点不是的细胞，让是的细胞在胰酶中，对细胞是一种更大的伤害

avbn

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4 ?3 @. \" A6 `7 `9 j, B( p脐带间充质干细胞应该是很好消化的，你看一下你的分离过程是不是和上次一样的，可以做个流式看一下，我怀疑不好消化的细胞已经不是脐带间充质干细胞了

chrindy

有用PBS洗两遍，胰酶也复温到37度了，看起来只能是细胞纯度不够的原因？可是形态上看起来都还好，到时候跑个流式看看，希望是MSC

xiaoyuwsp

脐带间充质干细胞应该是很好消化的，消化也是细胞培养的关键步骤。酶的消化与浓度、温度、时间及手法都有关系

cloudycity

1、有可能是胰酶的问题，把胰酶事先放置到常温再用；6 R: j- W" L- G& D
2、细胞状态不好；

colins

有可能是你胰酶不好，最好是买来以后分装成小包装，每次用的时候区一支出来，不要反复冻融。再就是0.125%的胰酶我觉得有点高了，放在37度孵育时不好把握，尤其是你一次性做很多瓶的时候容易忙不过来，造成消化过度

zjhzxp926

如果胰酶没有什么质量问题的话，这个胰酶的浓度可以使间充质干细胞很好消化，一般放置室温消化会比放在37度消化时间会长一点，也就三四分钟左右，还有真的消化不下来可能真的是细胞不纯吧