脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

, m/ P7 ]  l$ j: p5 q- q) y% I* l' @2 Y6 [! I- R) T- I

5 d) z( t% _7 T' Q( s3 M* n- d$ `1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；+ J) h( `! c; E4 s" d9 Q
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
6 r7 e, c" a( i. h! [$ z3. 重复离心洗涤共3遍；' i" U) A0 ]7 |: Q" ~8 f/ L3 z
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；( T0 ]. N4 ^1 V; s
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
+ ~8 Y* ~, g# s# l; N6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；7 A- P4 U. M4 S3 W
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
* H. }5 }7 l& x6 p# ]; n

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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$ }# w9 u( @( `; v( O请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

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/ k  R9 e2 z/ ^- |* d+ \4 ?# Y/ l) B9 N* e5 h1 P( Q7 B
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 + ~1 i. J$ N4 Z, d! C/ X' B2 Y
回复 hengton 的帖子5 U$ ?  ]9 ?) }$ v
& f1 f; K. {3 d
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

1 v0 T0 M2 [( j
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
/ ~$ @% W0 J: e# c, X3 d, b2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

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$ X$ w7 X. {6 Z; D  }% R) S
* b, C1 i" k3 d" B# E$ y9 Y( ]我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子# j5 V8 t/ _* E% A

& r3 x" E  G6 ?) U6 D8 O! s. R我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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* ~# m6 x4 D0 l! `  x
: P- `' h: Z" p, j1 n好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？