脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

8 @6 E+ d8 u: N9 g) F
" R; _; v( _$ k7 ?2 t: ~
! E9 p0 P0 f  _( j7 |' m1 p1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
; M3 r% T4 `9 G& r2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；! |9 p: J1 t, x, o3 S
3. 重复离心洗涤共3遍；0 w9 R# Q6 d0 I
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；: x: W: {9 ~8 G* v4 b) l
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
/ G( c1 u8 P/ i1 M( b/ W6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
. Q9 A3 r( b* l: l! h$ h% k7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
7 W( J" K5 o- H: V2 J! D4 {

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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- R# j# f- t5 r请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

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2 o: t8 G) X2 s* E: V( x& U4 i8 ]2 q# `4 c5 p& l
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 $ ^9 O9 ?1 ]1 o. u7 A1 [# c
回复 hengton 的帖子% o0 [6 n% |, G# ]1 B% Y0 A1 U

4 u9 w) ]( \' s8 {8 w" O请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

' |; z# q( B+ D5 `  O1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。3 x  k. y/ P. j: E% \6 H
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子% l; [  ]/ z2 P: v/ @3 w5 h
3 s5 T* i# ?# P2 z, {% P
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子3 p, i2 J5 |) |0 |
) i: v! V. s# z, v5 n0 A& Y+ c( n& V- T
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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1 Q- v# a2 Z6 s2 w好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？