脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

* J$ n! u# d, Z# i% [; H
! b& i5 [" k5 }$ ]+ k) ]8 y0 e1 T0 g7 C4 \- }  J" e1 P; E+ A
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；# J/ W8 k; [1 B. C
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
" ?- Z: M9 T; r5 L3 x6 ?8 I3. 重复离心洗涤共3遍；
. z: R# d5 ]4 b0 c  S4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
& O. [( I5 X! e! b  j6 y5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；9 I; T9 M5 {% z5 ]- [
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
2 s3 D4 b( j' b& g7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
9 e; I/ L' N' a' ^

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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( f* \6 h0 {, h
$ j8 f& X: p1 n+ t请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子# r# J7 b/ W. L1 m  @

' ~* l0 p' J# l- @3 {2 ~5 g不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
! A, n6 A  m) r" O* D7 q回复 hengton 的帖子
1 }5 A& R& M  r- w( O$ K# N
9 `7 A, [5 m+ j; _! ^4 K1 y请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

. Y1 d6 U. r; O& A/ u1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
# H1 c2 Z! n+ Z3 s# z  Q1 H- x# u" r2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

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: l) o# \3 Y! X/ @( V) ]3 K5 R2 n) o
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子* G+ B; w; Q& M/ Q

( C8 A) p# N, M& m* T我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子' C- C, J, ?3 _" \6 w
  y  X9 X  o, d
好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？