脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

4 a, Q; q& ^' ~9 Z6 T  L, r  }" a# m- X" _

$ e9 Y$ {5 E' D% G1 w3 W, A* i, t; ~1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
3 V  X$ g  X3 ]2 b2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；* r, r3 `  B# m* G8 \! s
3. 重复离心洗涤共3遍；
! y  N/ r1 Y6 ]4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
: k5 V$ t; ?& K! e5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；1 p/ X; w7 y. S
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
. E2 b* w5 l" H* S0 ?# W: p7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
! j' _# s/ c' v

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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# A5 |5 m8 S4 g) t8 u
0 D  T- z" R& Y7 b请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

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0 r# ~5 u4 j# j4 Z1 _. k2 t& S2 G* p4 A3 K
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
* C: A5 c4 M% P, H( S回复 hengton 的帖子
! X: a* K% B& K8 C( C, H! C6 @/ g$ w) @) }" `% X" J( ^. e
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

/ Q4 P; x4 R  o* {1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。4 W: K9 y* c3 i, ]3 A
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子  [) k# H1 x7 D

, P% c5 U, ^! @6 o) U! P2 Y我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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/ {# j, `8 c2 W. r3 U- l
. z% P# x/ r" K2 V3 ]5 t5 ]我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子/ B. P( f7 \" M' j! v0 Z' b  ?& _, r6 P
9 q; N; W7 P2 y' t* Q* Z
好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？