最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

回复 swtarron 的帖子/ [' d% N  r3 O% X

% e2 ^. @/ R# A/ q- d& C这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。
% [+ M3 s  A+ D/ X看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。
* I* c1 n% k' W0 R先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
) S: h& v3 F2 Y7 Y( \8 ?8 [这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。. c6 K! Q( L. C1 `
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。) K- Z. e) E; f6 R* J
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。4 M1 h$ r4 A& v8 C  ?; P1 v
做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准
3 m0 e; }1 v9 M, OM Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317
$ m: m8 T; c& z  R( {
0 B# [  \  k* a* n; I7 o2 E# g' C# q( q9 H2 Y+ _4 C; h/ v
间充质干细胞国际捡测标准! q6 w7 r: n1 |5 P! ~
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,
$ H' u, u8 k  G2. 细胞表型
# [; b& g. ^: |8 }3 w正 (≥95%+) 负 (≤2%+) % ~4 F1 R( g& w; ]/ f/ p
CD105 CD45
$ s: V$ G2 Q2 r. }CD73 CD34 8 l# O, ]# V) e' s, d
CD90 CD14 or CD11b
3 A' t* f* j0 P! q! n! qCD79a or CD19 & W1 r+ o* u! L) p8 [8 f9 H1 C3 w
HLA-DR 4 ?4 M3 B8 |% Y) c
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

回复 edwardellen 的帖子$ s* u9 m7 Q& Z% n8 u8 c6 s8 O

3 X3 v# L6 }2 D6 }0 q你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标, u. j, b* o' J+ U4 g6 X

ych123

回复 edwardellen 的帖子2 z, x& N# @3 {) B/ G, [% g* R
8 P3 Q- \- X( W% u
你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢