最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

回复 swtarron 的帖子$ n( _9 H3 H4 H4 p; n3 z. E

2 ^* P9 J2 m: \8 A这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。7 p  m+ K& h6 J3 h, a
看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。
0 n# E2 E+ c+ T" d  G% P% m先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
6 O$ k0 _# _! h3 z这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。3 a- ^2 R9 p* z4 [6 I7 O6 J  \
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。4 S  |( v6 e& I
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。/ L! S0 R: t! w9 ?8 |. |
做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准
! L! \3 @* V; U6 Y" mM Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317+ s3 }! a& h* A2 ?3 S: J

4 `2 \0 j# s+ B
# K, j( n( V; r7 Z8 ]间充质干细胞国际捡测标准
7 b+ G2 r% L7 Z4 _+ p1. 可在塑料培养器皿上贴壁,
( r2 Q3 Z0 {9 v8 u3 `4 F' T  ^  d) D2. 细胞表型 % u- z$ R1 U& N% x! S
正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
  F' {7 o, ~6 _- q% n+ y% nCD105 CD45
  t2 A, B! v+ N7 L  tCD73 CD34 4 ]1 K( Z8 k' X6 E/ g3 r- a1 H
CD90 CD14 or CD11b
# j3 c1 k5 X$ q# |2 UCD79a or CD19 ! t; C) B+ C6 T4 Y+ ?5 A8 O
HLA-DR ! L8 G7 T3 T( r) l. \  p
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

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7 _% z& _. @8 e- e" K. R0 p$ G
. }0 c: Z' J) Y/ u7 ]你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标
; ~8 q# l6 ^, z

ych123

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8 E& p3 D$ t! q! G5 w' V0 c
3 i# ]2 s7 i* `8 s) ]你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢