贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
8 o  i' }" S2 d  f一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。; L' c6 T( M3 s) X# _& E" F
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。/ X2 T) l2 G3 W& Q0 e) X. L, I
: X, B( I/ n. e: q2 S7 R& l; w
问题1：: ^  G, Z' @: l% O9 F$ N! e- s) ^
网上看到的脐带结构的说法是否准确？
  c5 d  A+ O2 t* g1 G  N" {问题2：
4 I* j$ D" q! p6 R* E0 s; S处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？
% g  ?7 i* d2 n1 h4 g9 G问题3：. k& P9 Z, Q( s- X! A. f! Y9 ~% ?
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？( h& }+ z0 D# t' Y+ g
问题4：% v- a: ], z# t5 N0 ]
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
' S- w1 b( U/ `5 W& a

saliai2016

最好将羊膜去掉，可以保证细胞的纯度；/ e: J' H. X0 [7 h; e
至于手术刀和剪刀的问题，个人觉得，剪刀可能更好操作一些，剪得碎了爬出来细胞的概率相对大些。

晗晗

1.网上说的没有问题; r' v% x/ V8 V
2.3.组织贴壁法这些可以都不用去除，要是酶消化法就需要剔除外面的羊膜/ M& }4 w6 u1 L3 n  B
4.还是用手术剪把，因为那个东西有点滑，比较艮，用手术剪比较方便

tingting2113

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8 a% k2 e+ |5 W; k* K
; i: L# Z  t4 q7 Z, L1、结构准确
4 k/ Z4 r* w# G' V- ^1 }% k. d0 `2、不剥离羊膜爬出的细胞比较杂，影响后续使用。
: O4 y- G3 U1 N3、我们没有去处结缔组织这一步。
0 j/ ~$ o. `; ]/ h（1）纵向剖开脐带小段（我们一般直接用组织镊撕开）。" M  F  q; A% d- a( R& Q
（2）去除三根血管，其间静脉壁比较薄，去除是时候要注意，如果去除不干净，培养的细胞中可能会混有静脉内皮细胞。) I* I9 A8 z: h. V+ Y5 ?/ k0 Q* N
（3）此时静脉已展开呈现片状，直接用组织镊撕取华通氏胶，避开最下层的羊膜，也就是脐带的最外层。* q; r5 Z' I* g7 o+ p0 x* S
（4）剪碎，培养。5 H  b, j4 t& t1 Y9 B/ z
4、手术刀切的快块比较大，另外操作过程暴露面大。剪的话，直接把华通氏胶放在离心管里，剪起来很方便。

jifengtang

回复 suruyu 的帖子1 O/ V6 c) b+ L# c' ~) g

, ]) |2 l! a4 X  K0 [1 g$ s非常感谢！！！

suruyu

1、结构式正确的；
) \9 I7 T8 ?) A2、我们不剥离，细胞状态一直很好，纯度也高；$ R. |0 j* ]6 W# ~7 @
3、我们通常都是直接剥离完3根血管，剩下组织全部贴壁培养了，木有问题；
0 |  C* y( I, B& r7 [. R4、用眼科剪很容易操作。

happy_noel

1.解剖结构准确，是这个样子。6 y0 `+ I4 ]0 l; X. B. L/ e; z( t
2.不剥离羊膜，对爬出细胞影响不大，杂细胞都可以通过换液去除掉。
  R9 I, \% D0 m  `9 q# j) \3.里面的结缔组织不用去除干净，没有太大影响。
6 E" b0 u- s  i% D2 U4.用剪刀比用手术刀好操作。

jifengtang

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3 a6 o) j6 Z9 B% l3 |
7 Z" r6 L* V5 ]  v! D+ C+ p非常感谢！！！

firstaider

回复 jifengtang 的帖子5 c, U# ~% r5 k8 ?' Z  M
9 E5 B  J  U5 T- J7 O; G/ Q
问题1：
+ ?0 d0 \5 t2 P+ I脐带结构的说法准确
4 S! ?* M4 w8 A0 q" E3 ?问题2：' }/ S7 ?# F* r7 {7 ^6 Y0 u5 h2 R+ I
处理时不剥离羊膜，上皮细胞会影响原代细胞爬出% N3 F( s, Z9 @  p
问题3：
4 b7 Y) A' F& o" Q0 b里面的结缔组织不需要去除，否则华通氏胶得率太低( w) b5 H+ X$ q/ a, w
问题4：( y9 E1 S  v4 d. C* [
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块降低了细胞爬出的效率

zhangjieyctc

回复 wuhuaguo88l 的帖子- j) J' _$ h, b" n' N5 T; r
" K5 g9 G& h  o- _6 B
结构既然没错的话，那结缔组织在里面没有影响嘛？