贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
3 h4 y$ h. d8 i" l3 e& c4 v一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。$ B  E& n, g/ k% h3 g
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。4 ]$ w. y' a- @

8 h1 ]" J! d+ N- o* k问题1：
! m6 S+ h6 o7 d# r" T8 \; S网上看到的脐带结构的说法是否准确？
0 g* U  m) N; i) q% D# C问题2：1 @2 l2 W2 ^4 b' w/ C
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？
, i) d7 c) I; O+ }! v问题3：
1 \- S  a* |* u* W. _3 o里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
- ?0 b  A+ z' A问题4：
7 |+ z. s) N. C& y, O一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？( s% t3 Y4 a, u$ _) \

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的. Y  ]4 L! V+ s7 l& l: w( \1 |0 A
问题2：一般是要去除羊膜的
3 t$ ?( f0 `* R5 d$ |5 f问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
8 h9 k4 l; s' }# g: x问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子* B. X# Q* q3 w  ?" [2 C3 N
2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状7 A% O; s5 s' Y
3：可以不去除$ t8 \$ `/ b- d& T
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题
1 f* q6 m  b2 d  v. @0 R2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂, q( C* |# S# s4 j: z1 v5 t
3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来8 c" m) o  [* c' D% _
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；9 V5 M- Y9 N% u6 t9 c) Z
2.做原代一般建议剥离羊膜；. u( g' k9 J1 o( O/ Y* ^) ?& b
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
7 p0 E) U' ^4 Q$ Z! x4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子, e1 ]. H  W% Y: F; G
; y+ D1 Q$ b' t/ }% i
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子
0 L5 i, D, b$ g7 f. c' u" K
1 l$ r: U' R2 Y6 i% @; D. D/ P$ Z4 _羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；, f( U2 {6 t8 r3 o% I( T$ z
2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；0 J  M# G5 T# k7 V( z
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；8 K7 B4 c+ s: Y0 c$ }' d" ?7 v
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；8 R3 d9 f( w6 Y1 Z# @' s" @) W
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长