贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题

jifengtang

最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
6 e1 z+ J% ~/ y# S( ?一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。, U4 E. F6 G' v( u! ^4 E- i
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。/ u. m2 J9 T; s! m" H0 x6 O

; Y: L# v# g4 ]  c问题1：
7 Z" N! j( O2 Z- [) E) u0 m2 e* w+ W网上看到的脐带结构的说法是否准确？
5 G6 U6 N% F, p6 ?5 k问题2：# ]& t+ h5 C( ]8 _# x+ O/ V
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？! I- `& M! Y/ ^/ }
问题3：
7 u4 M5 p' l2 q+ _. B里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
# A/ d* n0 a9 r- `5 A" T问题4：
6 m6 u! {% a8 w9 e, Z+ W一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？9 D: ]( s( a" @; c

wuhuaguo88l

问题1：网上图片还是比较准确的/ W3 w* I  z& M. L
问题2：一般是要去除羊膜的& E7 K5 U% u; E: D. i
问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代5 x' D& w, O& o7 c4 K7 Z
问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。

haibara007007

1：结构非常准确，就是这个样子- w4 @4 H5 s5 y7 V; R/ t( }8 E
2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
3 }' f+ d$ w+ \3：可以不去除9 @2 _3 a  I$ E; ^7 S
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过

chuanbaozang

同意楼上几位的回答

fuyinsheng

1、结构没有问题6 x, ]5 ^* d& v* J
2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
! _: Z& c8 j0 F9 }+ e2 R& j3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
4 l4 i6 ]* w  ?4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些

月_幻影

1.结构正确；3 X2 n) q) H4 ]
2.做原代一般建议剥离羊膜；( t( d2 C! k5 Z( ]4 @
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
0 H$ n! s, C+ m; I* ]; z4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子
+ \: H* q" e, {+ y7 U0 k+ \+ j1 Z
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？

fuyinsheng

回复 jifengtang 的帖子5 v* l" j; p1 x% ]! b" |& N1 M

6 r. s- d4 n2 w$ r9 _- @3 H羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层

小豆芽

1、结构式正确的；
6 R1 Z7 x; L; ~6 a3 q2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；
* V( J8 ~  ?$ c6 O3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；
) @0 J% l/ e& d( f6 p" u  `% ~4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。

redmaple

为保证细胞的纯度，还是要剥离；
; a' p' I3 b) ^% p; c' C$ g: |不剥离，杂质太多，影响细胞的生长