分离的脂肪MSC增殖很慢怎么办?

zhen022

最近分离脂肪MSC，方法是获取大鼠腹股沟白色脂肪组织，然后剪碎用胶原酶消化1h。离心后去细胞后培养，用的是hyclone的a-MEM+10%FBS血清+双抗培养。细胞在开始有一些咋细胞，传代一次还可以，杂细胞较少。就是再次传代时候会遇到增殖相对较慢，大家培养的时候是加了生长因子么？还是血清不对？

bianpy

你多久第一次传代？一般密度低的话就长的慢

woshibotao_01

你原代和传代后用的血清是同一个批号么？! v' U0 N* h  Y5 p* c# x1 {
因子可以加的，利于细胞增殖。不加因子，细胞长的可能不快。

zxd962735279

回复 zhen022 的帖子1 J# j0 s% W! h% f1 O0 ?: o

' t! Q0 v4 p* v- ~脂肪间充质细胞的生长速度一般在第一次传代的时候就基本确定了，与大鼠本身的状态有很大关系，如果原代传一次后长的慢就重新做吧--建议哦，如果不想扔就把血清浓度稍微加大一点试一试

zhen022

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貌似七天左右，不过第一次长的基本八九十的覆盖率了。还有我的消化是0.25%胰酶+0.02%EDTA，消化的也不是很理想，比较难消化掉；我看赛业的培养消化是0.25%胰酶+0.04%EDTA，你的配方多少？

zhen022

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都是一批血清，我得看看要不要加因子。

zhen022

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( K2 Y4 p) X, o6 H% i& l
都是一批血清，我得看看要不要加因子。

zhen022

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6 u8 {5 T8 D2 O
: j) N* ]) r6 Y; Y7 H8 h也可能状态本身也不好。我的培养基是a-MEM，但是是hyclone的，之前用l-DMEM都不行，换了a-MEM形态不错，原代也长的可以，就是传到p2时候就不理想了。a-MEM要是用gibco的都得三四百，小贵啊。

zxd962735279

我用的是DF12,或者低糖的DMEM都行，养这个细胞，你可以试一试啊

bianpy

回复 zhen022 的帖子9 K0 j, r, ~+ U' x

: V" C7 ]! z+ N. T我养的间充质干细胞，刚开始也很难消化，后来代数多了，纯了就很容易消化了。不过纯之前，长的也超级慢，状态也不好。