脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？& V9 f6 M  \4 H
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具体操作：2 @% L/ f8 X% `5 |
1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。! G( i, m! W' g4 [2 z" f) w
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。: C9 _3 z: P: Q) j. Q/ z
3、培养瓶用培养液润洗过。
" l, X7 t7 q$ d' o9 `  Q& I4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。
8 R6 V; `) z* S5、培养液：DMEM+FBS+双抗。
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木头1102

有可能是脐带的个体差异，或者放置时间过长；培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了，效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的，如果时间不是很长，可以在等等；如果时间挺长了，就传了吧，注意传代时细胞密度，可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了，看能不能再获得点细胞。还有就是，组织块贴壁法最好只用华通氏胶。

jenny114402

我们都用皿培养，你可以试试悬浮法培养，操作简单，正常基本7，8天长出细胞吧

haibara007007

回复 jifengtang 的帖子6 A" T8 k( u  @: y1 u

4 e0 b  D% Q+ V( ?5 w你可以试试把脐带剪得再碎一些，多贴一些，应该会比较好，我们现在都贴很小很多块，贴三个75t，这样基本都可以爬出来

张杉杉

我也是新手，刚刚开始养脐带间充质干细胞，静置7天后观察，一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么？

jifengtang

回复 木头1102 的帖子* \, B  w, o  R7 K# T* J% R
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基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

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悬浮法？是指酶解法吗？

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子
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( D6 I- B8 W) w) s) a( X大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

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培养液，血清用的什么？

张杉杉

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; J6 X( q+ c9 p4 ?/ N# a( Q培养液用的HyClone的α-MEM培养基，Gibco的血清。已经静置培养7天，第八天换液后，又静置四天，今天观察培养基颜色，没有变化。