关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子  E2 T+ w) V: `. k3 ]1 ]
9 C9 D0 l& M+ D; D* v$ a# G
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？4 L- h7 K0 }  u* a2 q
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
; g0 U. z) J* L9 w; v3 s) @& a6 ^9 h培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？5 E5 s( E: x6 N9 j# P4 W
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子$ ^( C' {% o+ F% w1 n3 }2 j* A5 q* v
; X  U/ r; G  G: b* X% o! N
1、这张照片是培养几天的？
5 R0 L( `$ \; Q: M6 h+ g# M9 a$ N2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？: u8 H* [+ J" T8 K9 ~5 q: M4 q; I9 m
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？" A1 h% i% H% B. f
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
, J# m$ i% @+ c+ n了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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& ~7 D; G& Q7 I9 J7 d+ K% l( v. G1 |! N  o2 e; v4 ~7 \
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
$ ?1 o% D$ R# V0 i# {2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~! T# J" d' p) e" [0 O' R; t! \
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
/ d$ s: v% d( y' o4 n) u6 M4：长满50ml培养瓶花了18天。
% T6 @: _: o8 |1 G# E+ Y谢谢~

liaoyanstudy

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5 }  \3 L$ [% \; F: y* L% c' l+ Q) Z* s- s
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；. k( T( s( d% {8 ~! n8 ]
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清* k/ a+ ~, e: y9 {, P
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
3 J7 I* d, ?" e7 O- c9 ~3 p4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子/ t; i0 V, ~3 x* i

: \+ ~8 N1 G; ]2 Z/ B! a/ h谢谢~