关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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, N6 {0 S. c' f6 A, l: W
- w" E; Z) `' Z+ ?你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
' Y; O! Z1 [& D, N. T临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？& n( s+ z/ E* Z* w# ]7 u
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？2 }; B/ k$ K, _6 X
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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# j: e0 K) x  a. D+ u6 s6 R, m4 D+ i: J1 u
1、这张照片是培养几天的？
# u- V2 G$ }' }: r6 B3 y8 X2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？+ @" L1 p6 Z: _: g, k
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
- ^/ y7 p9 _- w' c1 e4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）+ A8 y# M, ^3 e# W) }$ F" ^
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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5 S1 y2 s0 e$ S0 H# S) T% w+ F
/ _' j, {* y# z: ^1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
- o7 M- \) @- b' |2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
: T- T( ]) Q2 t9 G; q3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
/ q8 }+ i" s+ ^6 x3 e4：长满50ml培养瓶花了18天。, w2 J0 l' p( x0 S
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子  O% D' j5 |, I& A+ ?
) s% n: O5 r% f  Z7 T
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；& u* ~& x1 j8 z6 c/ h
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
* x. T6 N- |0 R5 \- Q, J2 {3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天: z2 j+ D, R' T, O! I+ h# w! J
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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6 F. D' n7 A- G" s$ G) a2 e0 m; i7 i; D' ]- u1 p  C( T, h- I7 n
谢谢~