关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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) W- U! y$ S! W8 V/ ?; P/ E; S9 E! d, ?( Z
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？7 S  f! f2 n3 V4 j# H
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
, {7 g. a% N. ?" K$ L3 k培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
4 m7 Q. @* l+ c- w越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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: m9 {. T; n5 _4 W+ B, Y! L( W8 ?) \# C
1、这张照片是培养几天的？
0 C3 a  \; c- h- P, J- y: x# }2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？( w6 G+ b  c0 M# {
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
7 Y* f9 o) d- J2 p4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
0 f, A" {3 O  G& `了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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! l" D5 k6 f/ M$ l7 x
( A- n7 t% N! L0 |1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；" W7 w4 f4 K  P/ e$ t8 A
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
: X% P7 _5 x, O8 B* t3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
2 _5 T5 d5 O4 T7 Q4：长满50ml培养瓶花了18天。
  f2 g! r& m- e2 q. v9 v7 j1 L谢谢~

liaoyanstudy

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' B( Y1 Q2 I$ i
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
6 e" Q  G6 J0 d6 b' n2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
+ v) h5 M1 J! _$ ]9 F3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天3 G0 ~, S/ F# K9 }
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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, d/ Z- M; I' j) C8 F5 Y' R: `
# u* c# r$ t; f2 H4 w1 Z/ W谢谢~