人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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回复 hhxxattxs123 的帖子; @5 ?8 {# K) G
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2 K& N0 L& z/ N% F9 x组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。
+ m* J* X0 H0 c) l% j还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。
& r/ d# a; m$ E4 P人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。$ j6 u% [. s5 T( Q" t
我们一般用人脐带分离MSC。
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了
4 M; I7 m! T" f9 [6 i时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

回复 hhxxattxs123 的帖子1 S# i' u+ Z" r

. g  ]; D( `  z你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。
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7 |( {2 D1 N- z3 m. `参考帖子：
/ b% l$ w- [8 P% o5 S( E脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
, j+ ^' i. s- Q) B. V5 |http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
/ l+ {$ p' R8 Q) U. ~请教华通氏胶的剥离：
/ n4 F1 ?% W" P$ p- {http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html% a* V5 E2 k) F* ?
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：
' O" n( G+ R0 O' B# [0 b: _http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
; B" w2 G+ q: O1 \" I% R9 n脐带间充质胶质的备置：
% D" s$ t) \8 h+ |; Chttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
, U4 t# Z3 u5 ]6 h. C9 B# C. j* K' d脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：/ s0 M& |' X% O8 P
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html! R; b; J$ o. n* t: t( X
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
1 B1 ]6 \5 ?9 Bhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
/ B9 _5 R8 n: Q$ l* H2 D- J# h
) F( o/ B9 F# Z# I6 z4 R& c* w参考文献：
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单个核细胞

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1 M- u! r6 t, ]1 z/ v$ _回复 hhxxattxs123 的帖子
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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。
0 J$ f) e9 b% O8 S1 f- D" g  Y
' y% Y  R6 K( @* `羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

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, i0 ?' S7 h6 ?$ A2 j! Y8 Q1 Y3 |20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

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+ @: u% p' w9 P3 \
% i* F9 E7 f8 }3 c+ O非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多