人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

grape

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组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。9 `% m0 m! F. V2 b- ~9 R
还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。$ W/ x4 R, H  i
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。
6 I. k" _4 s% l0 ~6 j  ?我们一般用人脐带分离MSC。# D0 [) _1 `/ i! m+ y6 ^
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了
2 o& u$ w1 z) N2 k时间长了，怕组织细胞死亡。

单个核细胞

回复 hhxxattxs123 的帖子8 d& O. u/ ^6 k) q) q4 x: V9 h
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你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。" L0 B/ p$ l5 y& }: d
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参考帖子：% r2 s5 X# J0 p0 u
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：9 T, A4 Z. I+ |% j5 Y2 k
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html1 g( B9 `. e" q# M$ F
请教华通氏胶的剥离：& y0 ~# Z' i) N
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html; n  X- A* S4 p' `. q! |# y
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：( Q2 H9 o; G/ D7 t- O
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
* G  d$ C- a2 c3 g脐带间充质胶质的备置：8 N: Q* H% w8 d! Q
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
* C5 E& u0 W  @( s+ z脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：6 E0 ]- X1 |# |' ?3 K
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html4 m* [" M0 g1 s+ e
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
' d' I: @( l# m: d# \http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html5 D% _, E6 e2 x3 G2 m0 _
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参考文献：4 I. @9 \& k$ s

单个核细胞

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回复 hhxxattxs123 的帖子, y+ K1 S* {5 R: }
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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。
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羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

xiaolong

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20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

hhxxattxs123

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* ~9 B1 i5 v8 e% Y+ S非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

院士站

是不是加液太多