关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
- K' T3 \/ N, H- S4 I# L3 _第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；, J% M9 Z3 V- C  D/ E
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。
2 X  U( s0 i7 d% i+ V+ i$ Q即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
" O# x0 S1 {& G) u+ l$ O油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
) ^  K5 N  N4 G  Z% f脂肪细胞的油滴很明显的5 y& G- m% X8 h4 q6 a; F$ A4 a& \4 {
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
& G; J; f! y* D/ F4 h2 a7 T2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。  w+ r# i; T! X  Q0 [
3，60%乙醇分色，
3 C0 _# B2 @  F- i: j8 h# x0 B8 f4，苏木晶复染
! u7 W; l; X$ x! |# S4 R5，水冲洗至变蓝。
+ G) ?9 }3 A+ N: e- v& P# f3 P

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

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% P) t& C. s, A; H5 t
  d) W- M) Z! G7 l1 Y% q% m) E6 W很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态," d6 b* R" w( P
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.6 _& w1 @9 x- e+ c
另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,% V/ ^# {# H0 i& R/ x9 a7 n) x
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。
& o2 ^# p3 z) Z2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。% j' \$ }1 m( g5 \5 v
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
5 f$ M7 N2 y5 O! a% j4 B9 G  v4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。
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