NK培养 谁知道这是那个文献的呢？多谢

xuexi123

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培养材料：
; c% O: k. Y9 i; Q无血清培养基GT -T551、生理盐水、淋巴细胞分离液Ficoll、人血白蛋白、自体血浆$ `1 W! k0 R, V5 i* x; _
细胞因子：IL-2（1000IU/ml）、Anti-Human CD3（5ug/ml）、IL-12(500IU/ml）、IL-15(500IU/ml）: P# X. {# a( w$ y: q1 O: ^& u  O: ~8 s! y
操作步骤：9 X% q/ p0 |# I5 n' k8 E# u2 v& D
1、采血机采集外周成分血50ml ，用生理盐水1:1进行稀释，1 v6 L' l# v' M# K! O& E4 G" y( C" X* p( J- |/ ^
2、由Ficoll液分离，去红细胞，收集初步纯化的单个核细胞：经Ficoll液梯度离心分离单个核细胞，Ficoll液与待分离的单个核细胞悬液比例为3:5分离方法: 取新的50ml离心管，没管加入15mlFicoll分离液，将25ml单核细胞悬液，贴壁轻轻加入管中Ficoll液液面上，注意单个核细胞悬液的加入不能打破离心管中Ficoll液的液面，离心2000rpm/min，20min，升速1，降速0，离心后，液面分为四层，小心吸取第二层的单核细胞层，用无血清GT-T551洗涤2次，离心1800rpm/min，5min，20℃，弃去上清，再用5ml无血清培养液混悬。: [5 D) x) d7 b
) L5 |  _4 T+ B1 S' S# B3、细胞计数：吸取约200ul的细胞悬液与1.5mlEP管内，另取一个新的EP管加入90ul台盼蓝和10ul细胞悬液，用血球计数板进计数。4 j7 Z7 M) F# i& H9 b0 x* m4 d
. E* ^  [6 H9 Y, b# Z4、将PBMC密度调整为2X106/ml，转入T75瓶中，培养基加入CD3McAb、IL-2、IL-12、IL-15，并置于培养箱中培养。每隔3d半量换液，并补充相应的细胞因子和自体血浆。- E$ W/ q8 Q$ ]2 d* I
5、收集悬浮细胞：培养第10d观察NK细胞并收获NK：将培养瓶内细胞悬液转移至50ml的离心管中，1800rpm,离心5min。去上清，用生理盐水再洗细胞2遍，最后将细胞组分混悬在100ml含1%人血清白蛋白注射用生理盐水中，转入细胞回输袋内，制成NK回输液。$ f7 ]2 F* r$ N5 S

121qwq

细胞治疗真的不好规范啊

baby00000003

也许是T－551的说明书吧？

吕小松

IL-15的作用是什么？

飞翔的烨

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9 I4 l* [2 U$ l3 x9 s! I6 y* n, Z6 E+ s! f
怎么可能这么简单

小沙弥敲木鱼

找到了么

yingfeixiang

这个是别人发的，拷贝的吧

yingfeixiang

回复 xuexi123 的帖子: F3 P8 o0 n, O% r; t! t5 t" H1 }
9 S: v% s4 t4 n  C# Z( {# |, k
不是文献，是别人的总结

免疫与细胞

这个参考意义不大。

wozuixie

这个参考意义不大。
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