CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子
6 X  |  i# v1 C" y& C4 @, x
+ \# Z+ H' ~2 U; B2 T7 e是的，感觉自己还是操作有问题。
# Z& g% f0 B1 _8 s* b$ |* M: D: l, U: Y是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。# t8 u/ W! k  g: T0 @
$ J6 J8 u- Y/ I# A7 u1 F1 @
请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）
, R2 j; w( D6 g: D# Z
" J2 Z2 b. f  V- \$ Y铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？: T8 v6 b: h7 H$ ^1 E

riverdtang

回复 木子小王令 的帖子
+ U6 L9 @/ N1 K$ ?' @# v3 d" b: w
. w0 b  q! h. k0 X* N; P0 Y是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

回复 riverdtang 的帖子
6 w* E4 e3 P9 r! C+ e, B0 n. ]6 l6 b" i, T$ W6 ]9 h. L- g
恩恩！谢谢大神！  v- P7 l! Q! g% s) ~9 h( ]
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子3 h) x: I1 M3 e) B* z! }% `) C7 n& @
/ X* y! g4 k. \3 C; O1 R
你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

回复 riverdtang 的帖子
$ d5 V. [2 u1 b9 c  C  C8 G- ]; O4 n$ y
你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

回复 winqi 的帖子
# x  n9 T3 f0 Z
8 @/ p7 b- U8 D, `- l  j4 W1 i! f用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

回复 六弦七品 的帖子
5 G: ]8 u+ u( F5 |+ y! Y& S) k8 s: o/ y/ P7 W1 `
启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

回复 riverdtang 的帖子9 d( u: f' Z' G6 b+ y
. w& x2 t9 a+ S0 @
请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

回复 riverdtang 的帖子* Y, ]+ O% a& `# ~5 \" K
/ C! a/ |0 F5 P& ]
你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢