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楼主: nailute1985
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关于PBMC复苏之后絮状物问题   [复制链接]

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发表于 2016-4-20 15:37 |只看该作者
回复 biluolinyu 的帖子! p" \8 q9 F3 m  e1 V, C

! W: `1 L' _( x; _; [您说的增殖倍数是冻存之间的50% 也就才是1.5倍的增殖么?您有做过这方面的验证实验吗?
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发表于 2016-4-20 16:09 |只看该作者
造成这样的原因,应该是血小板或者其他的死细胞释放物质导致细胞粘连。  h$ `' p5 `; M, T  V1 `
遇到过类似的情况,不知道跟我的是否一样。按照我的经验,希望能有帮助,共同学习。我的情况是,细胞成片,或贴壁或悬浮,但镜下观察并非死细胞,而且这种情况是在添加完因子之后的第二天一早发现。3 f8 W  t9 R3 \8 i+ `" s
将上层悬浮细胞转移到新的孔内培养,这部分细胞充分吹打(稍微加点白蛋白),经常观察,适度吹打!原孔内残留的细胞正常培养,不吹打,任由它自己发展,经过约3天的培养这部分细胞或许会慢慢散开、悬浮(并不是每个样本都能这么顺利),如果它基本不生长,里面的细胞逐渐破碎,说明它并不是我们想要的T,放弃它没问题,留着它反倒影响正常细胞生长。这样做,或许会对细胞培养有所帮助!我的这种经验欠缺,希望能对你有帮助!
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发表于 2016-4-20 16:13 |只看该作者
还有一个不太成熟的经验,装袋培养,这种情况会缓解
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发表于 2016-4-20 16:21 |只看该作者
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回复 nailute1985 的帖子% S: j( W3 X* a2 Z, C* t

4 Y8 r% h. \; s$ u, [4 r- F- p不是啊,冻存之前,也就是直接培养的CIK的增殖倍数大约是二百倍以上啊。冻存后复苏的PBMC如果做得好的话扩增倍数基本也能达到百倍。! `) H- q" c" L. o
我之前做过类似的试验。确实实验过程中发现如果细胞复苏后有你图片中的那种情况后,细胞基本不会怎么增殖
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发表于 2016-4-20 17:18 |只看该作者
回复 why77yhw 的帖子
7 v2 o1 a. ^; G# x, q
7 {( [. o& H3 a2 d0 G因为我们是小体系培养,转袋的话不方便。

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发表于 2016-4-20 17:20 |只看该作者
回复 biluolinyu 的帖子" {& x/ j4 K: q3 _
/ Y. [) ]5 S1 h( h  [. N
对,还有,您说的PBMC扩增倍数百倍的话,是指的所有细胞数对吧?不是单纯的T细胞,因为现在我在养PBMC的,已经D8天了,T细胞那种形态的比较少,都是比T细胞小的细胞,如果算扩增倍数的话,这部分细胞需要算进去嘛?
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发表于 2016-4-20 17:22 |只看该作者
回复 why77yhw 的帖子% B% J, ]2 o) x! I6 E! d; o
. m$ x# ]# E% s) Y* J8 r
我们培养体系就是用的白蛋白,按照您的方法,您把上层悬浮的细胞吸出去之后充分吹打的话,我觉得还是吹散不开,毕竟是DNA粘连在一起的。我的做法就是那种丝状的东西我就直接挑出来,虽然会损失细胞,但是后期会好很多。

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发表于 2016-4-21 14:22 |只看该作者
前期冻存pbmc时可以裂解一下红细胞,去除后期一些可能生成的细胞碎片,孔板培养毕竟细胞量有限,细胞岁片多的话一定影响细胞增殖
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发表于 2016-4-21 14:23 |只看该作者
这是多少孔板?24?
' m- p9 l4 g& U4 V

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发表于 2016-4-21 14:51 |只看该作者
回复 nailute1985 的帖子
9 ^% ]/ F  H0 i+ r
4 `- H% C& m' x6 X4 W! ~, g我直接用机器计的白细胞,所以应该都算进去了。培养十四天时,流式纯度都挺好的 CD3+也都是95以上
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