请教大家有关冻存液的事情

刘小明

请问各位同仁，冻存液最少加过多少？貌似这个没有个标注，谢谢大家浏览

yeshch

只要冻存液配得好，量一般问题不大吧，只要是冻存液与细胞悬液1：1就好了，我最少加过200ul，一般250+250或者500+500

阳光正暖

根据细胞冻存浓度来确定冻存液的量

刘小明

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能说的具体一些吗？

maz_2008

这个看细胞数了，想要保证好的冻存效率，细胞密度不能太低，冻存液的多少不是问题，只要DMSO，FBS和DMEM比例合适，都能work。一般好像推荐细胞的冻存的密度是10^7／ml？

芦苇浅

我们一般直接配制含有10%的DMSO的冻存液，冻存细胞时直接用冻存液重悬细胞冻存。根据不同细胞类型，一般比较皮实的细胞，比如293 cells，DMEM：FBS: DMSO比例是7:2:1，但是如果冻存干细胞，一般用FBS：DMSO是9:1。

swtarron

一般DMSO的终浓度是10%左右，以前看资料说最低5%左右，但是没有试过。

splinkerette

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赞同，我们冻存干细胞的冻存液也是直接FBS：DMSO是9:1。配成冻存液后，取相应的体积直接重悬离心下来的细胞，再分装到冻存管里。

niliu730323143

最少加500ul，最多加过1ml，据我了解，还可以更大体积，不过我没试过，冻存管就2ml左右的容积。500ul比较合适吧，复苏时融解快些。普通细胞和干细胞均可使用FBS：DMSO=9:1，贵就贵些，但是很便捷，先预先配好，放在4度冰箱，效果很好。

2357710447

冻存液的配置一般是终浓度为10%，但是方式不太一样，我用的是先配置成20%的DMSO，用的时候是先用等量的培养基先将细胞重悬，再加入等量的含有20%DMSO的培养基，为什么要这样做呢？很多人都没有考虑过这个问题，都是一味的按照人家的方法来做。细胞是很脆弱的，DMSO对细胞是有损伤的，先用培养基稀释细胞就是为细胞提供一个适应的微环境，不至于一来就受到DMSO的损伤，影响复苏的细胞活率，而且我做过实验，两种冻存方法复苏出来的细胞平均差距在5%左右，不信你可以自己去试试。DMSO放热的，配好之后先放到4度冰箱预冷备用