求助各位亲，PBMC分离出来红细胞过多，如何再尽量PBMC损失最少的情况下减少红细胞呢？

stella2015

各位亲友们，求助一下，有没有其他相对好的办法使得PBMC损失最少，而红细胞能尽量清除掉，不影响PBMC的培养，红细胞裂解液是一个方法，有使用过的亲能推荐一下好的品牌吗？？谢谢！~~~~

nailute1985

回复 stella2015 的帖子
& Z" d% d5 h; j
$ f+ `7 e, ?% c- N/ W2 HGE life science的ficoll分离效果不错，但是就是贵。

biluolinyu

ge的ficoll效果确实很好5 x7 R9 A* k' f" Q$ ~$ @2 K. |
ficoll分离的时候一定要注意离心条件，离心条件的差别会影响分离效果

LVXUEYAN1101

PBMC分离的时候FICOLL和离心条件很重要。首先FICOLL品牌很重要，其次使用之前最好室温预热；离心的时候升降速一定要调节好

拉二胡的拉尔夫

1.采血以后，一定要用生理盐水充分稀释。
1 c( U  w8 [, j) V2.注意ficoll的离心转速，降速一定要慢。, X# y$ k% O, O, g
3.吸白膜层的时候一定小心不要插入过深。5 L* {4 V/ }$ Z* A% ~
4.以上都不行可以试试磁珠分选。2 Z6 t2 H/ h/ c( c  Y) p
5.其实有点红细胞问题不大，有文章还报道过，红细胞还能促进免疫细胞成熟和增殖。

zhouweixing000

首先一点你实验室要有一套成熟的实验方案，
* l2 D# V# ?# P+ `% C& W再有就是把每一步的试剂特性把握好，& L! P7 j4 s' E( _2 t
再有就是个人的操作水平了，: h0 t3 Q/ M& F. [3 z- Q( g; o  A
在一个试验中这三点你要都做好了，
2 N* y3 H) M9 Y# A9 k. a: g实验结果自然就比较理想了。

生物太次郎87

①样品质量。血液样品要新鲜，有一点点凝血分离出的效果就不太好。②分离液的质量。我们公司淋巴细胞分离液都是自己配的，分离效果不太好。一般都是分离2次，第一次用50ml离心管（装20ml分离液）。第二次用15ml离心管（装5ml分离液）。③离心条件。条件不合适，白细胞损失就比较多。其实红细胞多也没事，我养悬浮细胞，红细胞多，连红细胞裂解液都不用，哈哈，直接传代到100ml体积时，半量换液，之后越来越好养了。有需要交流，可进一步讨论。

Liyun65

小心操作还是很好分离的，有少量的红细胞应该是没有关系的。5 t5 @- u  I$ o' l% c" F6 [8 Z! X! t
要分离的血液要新鲜，放置几分钟到室温。分离液也要提前从冰箱拿出来，放置到室温。还要注意分离液和血液的比例。加入血液时注意分层界面要清晰。离心注意缓升缓降就好。

伊诺强

几个注意点：一、ficoll管使用前离心；" p6 X% ~" H* g" f, u' ^
            二、血液到了后需混匀，再轻轻地转移到ficoll上，一定要轻！每管的血液添加量不要过多，一般不要超过ficoll量，或者更少；
( S& R, r/ V! D" \9 F. e            三、如遇到已有溶血现象，可用生理盐水或PBS二倍稀释后再转至ficoll上；7 s/ C) D) y9 C7 z8 _$ C2 Z- [% J
            四、提取PBMC时一定要稳、准、狠，争取一次性连续的取完，血浆可以多保留些，血浆中也有部分PBMC。
' k3 A( u- Z7 y            五、因为不知道您具体要洗几次，所以建议可以适当增加合适的离心梯度。: ]( d3 G4 ~  t$ N
            另外，目前有成品分离管，分离效果还不错，PBMC收集率挺高的，但是也要注意加血时要轻。希望能帮到您！

xiepu1

( c) `9 E, L& z- f2 x
* I* Y( y( O- F4 c首先血液质量要好，样品到后要立马开始处理，
3 D0 Y0 ?4 y5 y$ @其次血样尽量做到1:1稀释或大于，0 r! B4 {3 q* f0 }# f- |% F% }
最后血样铺成要先慢后快，铺样过程要均匀