CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

回复 lybai 的帖子6 S' h8 W0 ?* q( x+ O6 H6 }1 w
! |9 W  `3 u2 `* H/ A0 k' D
可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

回复 lyj-0017 的帖子6 N. `# F- i% i0 G
6 R/ g/ c/ ]9 i9 i, U; r
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。
7 a$ T% b4 A: Z1 p* l第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，
, ^9 t% n& _$ A第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
$ z+ H2 {4 v- |5 \  @! [8 [4 T3 a第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2
; r4 b. Z9 W- f: \, ~# W/ s3 F第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.
% ^0 [* A" j2 t+ ^* t4 g3 g: @第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2
, R" A: h& ?+ y第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

回复 阿秀哥 的帖子- l: s% `" o, m: _$ d

1 O# G7 G5 Z: }" w4 f谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

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% c. b5 N2 i  W. N
5 h! C5 Y* |" N2 ]( {4 H! H  O这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？5 b2 f' B+ G0 h, x0 K$ s/ Q9 O

lyj-0017

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/ V$ u$ G/ d* O, x: \( @  x
) V4 I* t1 o# j& T& S& Y1 i2 p% s因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。