干细胞培养与消化

zxb1105453899

之前用完全培养基培养脐带间充质干细胞后，用胰酶进行消化过后发现细胞会粘成一团，吹打不散，是什么原因？

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1.首先细胞培养培养时间过长，细胞呈现层状覆盖，消化的时候如果控制不好时间，等待细胞完全变圆脱落，那么细胞就是结团成絮状，不易吹散；
2 n2 w/ Z; g1 G# ~: D2 L0 }2.其次消化的时候时间不要太长，用手轻拍瓶壁，使细胞逐层脱落，不要这样不至于结团难以吹散，即使有絮状，用移液枪也能吹散；
5 N, B( {; V) `/ S" A# W3.再次次一点就是倒出培养上清时，用生理盐水冲洗两遍，细胞分泌的物质黏连在表面，消化的时候细胞结团黏连不易吹散；  T8 Q7 V& P9 z: O
4.最后就是用移液枪吹离心管底部的细胞时，液体体积不超过5ml，这样吹力较大，容易吹散，待吹散后再加入自己需要量体积的液体混匀即可。  
& V7 ]3 e3 Q- S" a希望对你有用！

zxb1105453899

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+ t9 I+ f+ n- c6 t5 _* s" c/ c非常感谢你的解答

cxs

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- U. |8 b3 I; @, P( S# W这位朋友，请问为何“等到细胞完全变圆脱落”反而会结团呢？有点不太理解

2357710447

回复 cxs 的帖子# E& h! C6 H" r0 o3 f3 u
* _$ l8 p& Z1 i4 K
1.细胞并不是一个一个脱落，一片一片的/ b5 P" x, B2 v6 Y! w0 K1 h$ g
2.密度过大，细胞相互之间也有一定的吸附作用5 U% }; Z/ a2 @
3.如果在细胞层叠时，不用盐水冲洗表面的分泌物，粘稠度很高，结团率极高