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MSCS的分离纯化问题 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-4-13 22:02 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我想请教大家一下啊,我想取SD大鼠的骨髓间充质干细胞来做诱导分化,但是取的时候纯度只有60%左右啊,怎么样可以提供它的纯度啊
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沙发
发表于 2010-4-13 22:02 |只看该作者
做的是流式鉴定的

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藤椅
发表于 2010-4-14 08:59 |只看该作者
什么意思?通过什么来判断它的纯度的?体外扩增了多久?不过实际上至今还没有方法可以在体外纯化或克隆化间充质干细胞,当前惟一的方法是体外富 集MSC, 即收集培养贴壁的细胞。经过多次传代和长期扩增的方法
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板凳
发表于 2010-4-14 10:22 |只看该作者
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理论上可以通过流式分选的方法,不过这个需要对仪器的要求很高,很少有实验室能达到这样的条件。如果时间允许,可以用有限稀释法(接种96孔板,每空一个细胞),将细胞进行单个培养,得到的单细胞克隆能达到高纯度,不过这样的实验要求时间就很长,细胞生长需要较长的时间,工作量也很大。  E# ~( R4 T' j4 e
如果不要求绝对的纯度还是建议用楼上的方法进行纯化。
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报纸
发表于 2010-4-20 23:55 |只看该作者
MACS

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地板
发表于 2010-4-21 00:35 |只看该作者
个人觉得纯度低可以从分离培养上改进方法,不知道楼主怎样分离的MSC。建议用Ficoll密度梯度一下试试收集后的细胞,扩增后再上流式看看
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发表于 2010-4-21 08:50 |只看该作者
回复 1# bypw
. ^6 a( ^# d/ k; v1 n; t6 X' ]7 A' M, b( p0 ?3 i$ s

9 X, R6 `# m: m4 Z5 f- T; h    楼主第几代做的流式鉴定啊,传代可以纯化,我用第三代做流式纯度达到99%
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发表于 2010-4-30 12:55 |只看该作者
看你用的是什么办法分离的,所选用分离液的密度是多大,这直接决定了你所得到细胞的纯度和增殖能力,而且要得到纯度高的细胞需要进行传代,一般在3代的时候细胞均一性比较好
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