小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

回复 15# 烂桃 $ ?3 p. _7 r4 d
去除肌肉后再泡酒精，那酒精会不会进入到骨髓腔里面啊？那样不会对骨髓细胞造成损伤吗？此外，你分离的过程中有没有溶解红细胞这个步骤？

angel-sakura

回复 5# china1983chen
+ I) s% ~# F( [$ c是漂浮的吧？你之前有没有溶解红细胞？我看有的文献上说要溶解红细胞，但不知道其他人是否有这样做过~

angel-sakura

回复 8# bypw
/ u( W6 Z( s+ A取肱骨是为了确保BMSC数量足够，毕竟是小鼠的~~没什么其他特别的原因，此外，我本来是准备直接穿刺冲的，但发现插不穿........所以就剪了，而且小鼠的骨头很细的，真不好弄，不知道你是怎么穿的？

angel-sakura

回复 17# jisuyun " Z1 o) y  l. T9 c  t2 J0 F
同求QQ号~~

烂桃

/ d8 ^9 ^! ^. e

) @' S  `% R/ L# _1 H+ c6 V回复 21# angel-sakura 6 m$ I# [5 ^) h& |5 e5 L$ m2 l
( ~2 s; k7 J9 H! f4 g& C6 y, G
. o4 ^. E# P7 Z1 B
    我没有溶解红细胞，我感觉有一些血细胞可能有利于原代细胞后贴壁，三天后换去大半液，可以轻轻摇晃把沉积的血细胞大部分吸弃，再两三天全换液，这时如果血细胞沉积多的话可以用PBS洗一次。分离股骨时注意两段不要剪断，泡酒精没问题，注意冲出骨髓时要先把骨上的酒精晾干，如果直接连带肌肉泡的话，会泡不透，很容易污染

tanhehe1006

回复 17# jisuyun ' W; }# j5 i) t

8 H( |6 p- R8 X3 x
+ b# v* [9 S; P3 @* ]8 k  119239794
5 i) e; C  g2 P$ g+ C5 V其实我是最近才专投养小鼠MSCs的，希望能相互切磋

angel-sakura

回复 4# tanhehe1006 6 o: K6 W4 [% l1 }3 m! @
请问你试过骨片培养法吗？这种培养方法怎么排除成骨细胞的污染？

tanhehe1006

回复 27# angel-sakura
4 X9 p- y5 t/ u# v2 e; n  e9 k; B" q5 O* h

2 A/ r' ~9 J& D; r. Q3 a: s, J" y    好问题，在多次传代中就消失了，况且骨片养的也提到p3-p8代研究么。重要的是在用胶原酶消化的那一步，骨片最好成一股粘絮状态，据我导师指点这样是MSC被消化下来和成骨细胞尚未很多被消化的临界状态。

angel-sakura

回复 28# tanhehe1006
) U' x7 X0 l5 {那你胶原酶消化的时间和浓度是多少？此外，你测了流失吗？

tanhehe1006

回复 29# angel-sakura
# }7 S' j- N( T+ Z6 `
/ |' z! y& p5 |: x2 N; `
( I+ A( n& |, J/ W" e 今天（昨天）我还做了。但是这回没有消化好，一般采取的浓度0.1%就可以了，时间我平常都是1.33-1.5个小时，我用的37℃摇床摇的。流式还没测，因为最近开始没多久，准备用消化的方法和多次传代的方法粗纯化后先反转录，流式正在预定中……那是必须做的，不知您做过流式没以及选用的标志物是什么？