小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。$ s& I, @' }6 |
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。' H$ [- r1 f/ e$ _$ Y) H: T- l5 T; d
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
1 f) ^* k8 S& O  K/ n  L4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。
' J, g1 n+ e, i' s" I& w* ^' e, C  f5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
, P3 u( I; T( N+ p5 {8 G6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。# [& k2 p& f6 |4 A- B
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。
  F# w+ i# X; W: x- A; Q8 m% Z1 o7 H此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的' |- X. O) _% I: _7 O
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
; c$ Z& V9 m+ H6 F; M! u

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 ( B8 D! f& R/ z7 r/ m
1 P4 ?# P7 s* K

- S+ x; {3 p/ h4 J    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：
+ A+ _6 h+ C% N8 }. H) G
, f2 }, S0 X) ?* E! _/ T3 f- b1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊2 t! `9 K, Q- W1 T
4 B. h. b+ I; Z6 V% T/ F# J
2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。8 b3 Q/ G. W4 A) h) `1 d
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻5 Y7 F4 I$ O% G% p5 f
4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006 " T: K4 M9 C2 r9 ]* f- v/ ?

# G0 q, W5 w8 i. N/ k
0 E- g' l7 l8 t/ Q% C2 S3 O    这是原代细胞吗