小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

tanhehe1006

回复 10# china1983chen ' K1 k4 B. Y$ V. e

0 A" S) L  p. Q9 i5 w9 G" a
: W$ M7 X: m" j    是原代，是p1的照片

tanhehe1006

回复 9# jisuyun : _) L. [. ~: F% z

8 x5 G4 P" ~. d5 m" ~
0 y3 h# a/ e* h  {+ E    你提的这个问题很好，但是形态是不能说明问题的对吧。我完全复制我上边发的一片用骨片养的方法，你看看这篇文章吧

china1983chen

8 J) Q3 @* m7 S* `
  Y7 X  \+ G' c) n1 e* C% _9 @( q/ K
回复 9# jisuyun 6 J* o- ]+ E3 u) D! w1 Q
$ }  b# T7 J8 Z/ N, T1 H
8 ^' z7 ]7 C% l# {1 X8 w
    这个就是MSC把，成纤维细胞不是这个样子的

烂桃

回复 7# tanhehe1006
  O* m# v9 v% a" s$ Z
' g& o# C, e5 o7 n# r" M( D9 X% x( Q, j
    这是原代吗，好像不是很有活力

烂桃

回复 1# angel-sakura " W( S5 A' s% s& b) l7 H; r
3 w! n, e3 N8 L5 n* G- l

3 m( ~& g% x: M- N' K& P, R% F    一般取股骨吧，在细胞室外剔除肌肉，泡酒精几分钟，剪断两段冲出骨髓，可以离心也可以不离心，我做的一般是离心后重悬接种，培养液用α-MEM或DMEM\F-12都可以，我个人感觉DMEM\F-12好一些，原代可以用15%FBS，传代10%就可以了，我一直在做不同动物的BMSC，形态都不错

jisuyun

回复 12# tanhehe1006
1 X4 {9 K, c) p5 Q+ Q6 D8 H, n6 d* @. ?: R9 B! v5 ]8 v8 J

6 K: {  i  S  ~4 n* M1 N$ I    我是新手，刚做实验。昨晚下了你那两篇文章，刚才看了一下中国的那篇密质骨培养的方法，也想尝试一下。不过胶原酶还没买。我的血清也是GIBCO南美血清，并不是他说的专用于MSC培养的血清，培养基是L-DMEM。你用的血清、培养基是什么？5 N# O. A! ]! \2 Q" K
问个问题：37度孵箱200rpm摇2h是怎么弄的？是摇床吗？200rpm怎么定的？

jisuyun

tanhehe1006 版主你qq多少？我们交流一下。

kqyy

1mL注射器太小,伤细胞

jisuyun

如果按那个IRAN人写的protocol，8h就换1.5ml液，一直到72h，会不会因为老是去动它而不好？有没有人用这个方法养的？

angel-sakura

回复 18# kqyy # `0 s) A+ t8 d" O9 V) y
请问你是用多大的注射器？小鼠的骨头很小，我觉得1ml注射器能刚好冲骨髓，不知道大的注射器能不能冲？